Генетика, геномика ва биотехнологиянинг замонавий муаммолари

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА 
МУТАНТНЫХ ВАРИАНТОВ РЕПЛИКАЗ ВИЧ И МИКОБАКТЕРИЙ 
Поляруш С.В., Арипова Т.У., Рыскулов Ф.Т., Карнилина А.Р., Сликшан Р. 
Институт Иммунологии Академии Наук Республики Узбекистан 
100060, г. Ташкент, ул. Я. Гулямова 74.
[e-mail] 
Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) поражает иммунную систему 
человека и делает человека восприимчивым к ряду оппортунистических 
инфекций, в первую очередь к туберкулёзу. Эффективность терапии при 
ВИЧ и туберкулёзе зависит от чувствительности ВИЧ и микобактерий к 
действующим препаратам. Известно, что в 15-40 % случаев у пациентов с 
ВИЧ и микобактериозами формируется лекарственная резистентность, 
обусловленная геномными мутациями микроорганизмов. 
 
В данной работе изучены мутантные варианты обратной транскриптазы 
(p11), интегразы (p32) и протеазы (p66) локальных штаммов ВИЧ и 
мутантные 
варианты 
rpoB-гена 
(бета-субъединицы 
полимеразы)
 

---

Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г. 
32 
M.tuberculosis
. Кодирующая кДНК перечисленных генов была получена 
посредством изотермальной амплификации и клонирована в плазмидные 
вектора для получения клонотеки генов. Были изучены последовательности 
генов 52 образцов пациентов с ВИЧ, при этом 7 образцов имели мутации в 
генах репликаз, что составило 13,4% от общего числа образцов. Анализ 
последовательности показал следующие различия в аминокислотном составе 
репликаз: выявлен один образец (1,9%) с мутацией V82A в гене белка p11 
(протеаза), три образца (5,8%) содержали мутацию E92Q в гене белка p32 
(интеграза), а в гене p66 (транскриптаза) три образца (5,8%) содержали 
мутацию M184V и один образец - мутацию K103N (1,9%). При этом следует 
отметить, что у одного из пациентов было выявлена двойная мутация M184V 
и E92Q в генах p66 и p32 соответственно. В тоже время среди 40 образцов 
ДНК
M.tuberculosis
, полученных от пациентов с подозрением на 
лекарственно-устойчивый туберкулёз было выявлено 27 образцов 
содержащих мутации в генах rpoB и gyrA (67,5%). Превалирующее число 
всех мутации было выявлено в rpoB- гене 
M.tuberculosis
. Так, частота 
мутации S531L составила 79%, мутация H526D выявлена в 5% образцов, а 
мутация по позиции 516 (D516V) встречалась в 9% случаев. У 7% образцов 
выявлена мутация A90V в gyrA-гене микобактерии. 
Полученные мутантные варианты генов репликаз ВИЧ и 
M.tuberculosis
клонировали в вектора для экспрессии в клетках 
B.cereus
и 
P.pastoris
и 
синтезированы их рекомбинантные аналоги для изучения основных 
кинетических показателей функциональной активности исследуемых 
репликаз.

---

Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г. 
33