Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Реактивы и оборудование: 
Препарат липазы (вытяжка из поджелудочной железы или 5–7 % рас-
твор панкреатина), растительное масло, гидрокаробонат натрия (1 %), 
фенолфталеин­ (1 % спиртовой раствор). Пробирки, пипетки, термостат. 
Ход работы: 
В две пробирки вливают по
 
1 мл подсолнечного масла, 4 мл
 
дистиллированной воды, 5 мл гидрокарбоната натрия и энергично встряхива-
ют до образования эмульсии. Липаза ускоряет гидролиз только эмульгирован-
ных жиров. После эмульгирования прибавляют 5 капель фенолфталеина, 
затем в одну­ из пробирок вливают 1 мл препарата липазы, перемешивают и 
поме-щают пробирки в термостат при 38 °С. Через некоторое время, в 
зависимости от активности­ фермента, раствор в пробирке с липазой 
становится бесцветным, вследствие образования жирных кислот, а в пробирке 
без липазы розовая окраска не исчезает. 
62 

---

Работа 14. Изучение влияния различных факторов на 
скорость ферментативных реакций 
Скорость ферментативных реакций зависит от многих факторов: 
концентрации субстрата, концентрации фермента, pH среды, температуры, 
наличия активаторов и ингибиторов. 
Влияние температуры на активность амилазы слюны 
Одним из характерных свойств ферментов является термолабильность, 
т. е. чувствительность фермента к температуре, при которой протекает фер­ 
ментативная реакция. 
В некотором ограниченном интервале температуры скорость ферментатив­ 
ной реакции повышается с ростом температуры. Коэффициент, показыва-ющий, 
во сколько раз повышается скорость реакции при повышении темпе-ратуры на 
10 °С, называется температурным коэффициентом. Для многих биохимических 
реакций при повышении температуры на 10 °С скорость уд-ваивается и 
аналогично при понижении температуры на 10 °С уменьшается вдвое. Для 
большинства­ ферментов максимальная ферментативная скорость наблюдается 
при 38–40 °С. Эта температура называется температурным оптимумом. При 
дальней­шем 
повышении 
температуры 
происходит 
разрыв 
связей, 
поддерживающих вторичную и третичную структуру, т. е. происходит тепло-вая 
денатурация, сопровождающаяся потерей каталитической активности. Скорость 
расщепления крахмала под влиянием амилазы определяют по окрашиванию 
раствора крахмала и продуктов его гидролиза йодом.