П. И. Гунькова общая и пищевая микробиология часть I учебное пособие

7.2. 
Окрашивание бактерий по Граму 
Все бактерии по этому признаку разделяются на две группы:
• красящиеся по Граму – грамположительные; 
• не красящиеся по Граму – грамотрицательные. 
В основе метода лежат различия в химическом составе и стро-
ении клеточной стенки бактерий.
Сущность метода основана на различии в химическом составе 
и строении клеточной стенки бактерий.

---

66
Техника окрашивания бактерий по Граму 
1. На обезжиренное предметное стекло нанести в трех местах 
три капли воды и приготовить три тонких мазка разных видов бакте-
рий: по краям контрольные (с заведомо известным отношением их 
к окраске по Граму), а в центре – мазок исследуемой культуры. 
2. Мазки высушить и зафиксировать в пламени спиртовки. 
3. Мазки окрасить в течение 1 мин генцианвиолетом (поло-
жить на предметное стекло полоску фильтровальной бумаги, пропи-
танной красителем, и смочить ее водой). 
4. Бумажку с красителем удаляют и, не промывая препарат во-
дой, наносят на него раствор Люголя. Выдерживают в течение 1 мин 
(до полного почернения мазка). 
5. Препарат, не промывая водой, обрабатывают 96 %-м спир-
том в течение 15–20 с, при этом предметное стекло следует непре-
рывно покачивать. Очень важно четко придерживаться времени 
обесцвечивания, так как при его превышении обесцвечиваются 
и грамположительные бактерии. 
6. Препарат промывают водой, накладывают на него полоску 
фильтровальной бумаги, пропитанной фуксином Пфейфера, смачи-
вают ее водой и окрашивают в течение 1 мин. 
7. Бумажку с красителем удаляют, препарат промывают водой, 
осушают фильтровальной бумагой.
8. На препарат наносят кедровое масло и рассматривают с им-
мерсионным объективом. 
После такой обработки грамположительные бактерии окраши-
ваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные – в красный.
Грамположительными являются микрококки, стрептококки, 
стафилококки, бациллы, клостридии, молочнокислые бактерии. 
К грамотрицательным относятся кишечные палочки, сальмонеллы, 
бруцеллы, возбудители дизентерии, холеры, уксуснокислые бакте-
рии, псевдомонады и др.