Klonal mikroko„paytirish jarayoniga ta‟sir etuvchi omillar.
Klon
usulida mikroko‗paytirish jarayoniga ko‗plab turli tabiatga ega omillar o‗z
ta‘sirini ko‗rsatadi. Bunday omillarga, hujayrasi o‗stirilayotgan o‗simlikning
61
fiziologik xususiyatlari va o‗stirish muhitining fizik va kimyoviy xususiyatlari
kiradi. Klon usulida mikroko‗paytirishda asosiy ishlardan biri ona o‗simlik va
boshlang‗ich eksplantani tanlab olish hisoblanadi.
Ona o‗simlikni tanlab olishda uning turiga, naviga, o‗ziga xos xususi-
yatlariga hamda fiziologik xossalariga e‘tibor beriladi. Olinayotgan o‗simlik
bakteriya, zamburug‗ va viruslar bilan kasallanmagan bo‗lishi kerak. Shuning-
dek, o‗simlik intensiv o‗sish davrida bo‗lishi, ya‘ni tinchlik fazasidan chiqqan
va faol o‗sishni boshdan kechirayotgan bo‗lishi kerak. O‗simlik piyozchalari,
tugunaklari, ildizmevalaridan bu maqsadda foydalanilganda (agar bu material-
lar dam olish fazasida bo‗lsa) alohida ajratilgan hujayra va to‗qimalarni
o‗stirish muhitida ma‘lum vaqt davomida haroratni pasaytirish yoki oshirishga
to‗g‗ri keladi. Shuningdek o‗simlikning ko‗payish usullari genetikasi o‗rgani-
ladi. Masalan, qulupnay barcha yo‗llar bilan ko‗paya oladi. Zaytun o‗simligi
tabiatda faqat qalamchasi orqali ko‗payadi. Bir pallali o‗simliklarga nisbatan
ikki pallalilarning regeneratsiya xususiyati ancha yuqori hisoblanadi.
Eksplantani tanlashda uning yoshi, tuzilishi va kelib chiqishi kabilarga
e‘tibor beriladi. Bunda hosil qilinuvchi o‗simliklarda anomal belgilardan
qochish maqsadida va umuman klonlanuvchi material barqarorligini maksimal
darajada ta‘minlash uchun kuchsiz differensiallashgan to‗qimalar boshlang‗ich
eksplanta sifatida olinadi. Daraxtsimonlarda yosh o‗simliklardan olingan
to‗qimalar, qari to‗qimalarga nisbatan tezroq ildiz hosil qilish xususiyatiga ega
bo‗ladi. Umuman boshlang‗ich eksplanta sifatida poyaning uchki qismlari,
qo‗ltiqda joylashgan kurtaklar, murtak, yosh barglar, qalamchalar, gul tugun-
chasi, piyozchalarida meristema mavjud bo‗lgan to‗qimalardan foydalanish
yaxshi natija beradi. 1975 yilda Grin va Filips tomonidan olib borilgan tajriba-
larda makkajo‗xorining yetilgan urug‗laridan ajratib olingan embrion hujayra-
lari o‗stirilganda kallus to‗qimasi hamda ildiz hosil qilishi qayd etilgan. Bunda
changlanishdan so‗ng 2-3 haftadan keyin olingan hujayralarda kallus hosil
qilishi va o‗simlik rivojlanishi yaxshi kechishi kuzatilgan. Bu holat o‗simlik
ontogenezida genetik axborotning o‗qilish jarayoni ishga tushishi bilan izoh-
lanadi. Qayd etish lozimki, yosh to‗qimalardan boshlang‗ich eksplanta sifatida
foydalanish hamisha ham ijobiy natija beravermaydi. Exeveriya o‗simligida
yosh barg to‗qimalari asosida olingan eksplanta rivojlanishi natijasida faqat
ildiz hosil bo‗ladi. Agar bunda qari barg hujayralaridan foydalanilsa ulardan
rivojlanish natijasida faqat o‗simtalar hosil bo‗lsa, o‗rta yoshli barg hujayra-
laridan esa rivojlanishda ildiz hamda poya o‗simtalari vujudga keladi. Bunda
eksplanta o‗lchami qancha kichik bo‗lsa rivojlanish shuncha sust boradi. Ikkin-
chi tomondan yirik eksplanta olinganda uning virus bilan kasallanganlik
ehtimolligi darajasi ortib boradi. Mikroko‗paytirishga o‗stirish vaqtining davo-
62
miyligi ham ta‘sir ko‗rsatadi. Eksplantaning fiziologik holati qayta ekishlar
davomida o‗zgarib boradi. O‗stirish jarayoni davomiyligi uzayganda esa o‗sim-
talar hosil bo‗lishi tezlashadi. Bu holat eksplantada yuvenil davrga o‗xshash
holat yuzaga kelishi bilan izohlanadi.
O‗stirish muhitini sterillash ham ba‘zida muhim ahamiyatga ega bo‗ladi.
Bunday paytda sterillovchi moddalar, eksplanta xususiyatlarini e‘tiborga olib
tanlanadi. Nozik to‗qimalarni o‗stirish muhitini sterillashda sterillovchi modda
konsentratsiyasini kamaytirish talab etiladi, chunki yuqori konsentratsiyalarda
qo‗llanilganda sterillovchi modda eksplanta tarkibidagi hujayralarni nobud qilishi
mumkin. Eksplanta ko‗pchilik hollarda zamuburug‗, bakteriya infeksiyalari bilan
kasallanmasligi uchun fungitsid va antibiotiklar bilan ishlov beriladi. Bunda
hujayralarni benzonat natriy tuzi bilan ishlov berish yaxshi natija beradi.
Hujayralarning xususiyatlarini hisobga olgan holatda o‗stirishda qattiq va
suyuq fazali ozuqa muhitlaridan foydalaniladi. Ba‘zan ozuqa muhiti xususiyat-
lari trofik elementlarning yuqori darajada harakatchanligini ta‘minlashga mos-
lashtirilib yaratiladi. Masalan, atirgul o‗simligini ko‗paytirishda o‗simtalar ikki
qavatli ozuqa muhitida yaxshi o‗sadi. Bunda ozuqa muhitining pastki qatlami
agarli muhitdan va tepa qavati suyuq ozuqa muhitidan tashkil topadi. Eksp-
lantaning joylashish holati ham o‗sish jarayoniga kuchli ta‘sir ko‗rsatishi
mumkin. Bunda ozuqa muhitida eksplantalar gorizontal yoki vertikal holatda
joylashtiriladi. Shuningdek hujayralar o‗stirilayotgan probirkalar tiqinlari tipi
ham farqlanadi. Masalan paxtadan tayyorlangan, plastmassali, shisha yoki
metall tiqinlar ishlatiladi. O‗stirilayotgan muhitdagi ozuqa miqdori va eksp-
lanta o‗rtasidagi nisbat, optimal yoritilish darajasi, gaz almashinuvining qulay-
ligi kabi omillar ham o‗stirish samaradorligiga o‗z ta‘sirini ko‗rsatadi.
Ozuqa muhitining tarkibi har bir o‗simlik hujayrasi uchun aloqida tarzda
tuzib chiqiladi. Klon usulida mikro ko‗paytirish jarayoniga ozuqa muhiti tarki-
bidagi gormonlar, vitaminlar, turli xil tuzlar va uglevodlar miqdori o‗stirish
jarayoniga ijobiy yoki ba‘zan normadan ortiq ishlatilganda salbiy ta‘sir ko‗rsatishi
mumkin.
In vitro
sharoitida ko‗pincha Murasige va Skug, Linsmayyer va Skug,
SHenk va Xildebrandt, Nich, Gamborg, Xeller va boshqalar tomonidan ishlab
chiqilgan ozuqa muhitlaridan foydalaniladi. Odatda foydalaniladigan Murasige-
Skuga ozuqa muhiti tarkibida anorganik azot miqdori ko‗p bo‗ladi, bu esa soma-
tik embriogenez va organogenez jarayonlariga turtki berish xossasiga ega.
N.A.Kuzmin, V.V.Vnukova tomonidan 1997 yilda qattiq bug‗doy ustida olib
borgan tajribalarida Murasige-Skuga va Gamborg ozuqa muhitlarida kallusdan
morfogenez hosil bo‗lishi o‗rganildi. Bunda Murasige-Skuga muhitida auksin
miqdori ko‗p bo‗lgan sharoitda qattiq bug‗doy xromosomalari to‗plami barqaror-
ligi ortishi kuzatildi. Ozuqa muhitida umuman olganda NH4: NO3 nisbat miq-
63
dorining qanday bo‗lishi o‗stirish jarayoniga ijobiy ta‘sir ko‗rsatadi degan savolga
adabiyotlarda turli xil fikrlar mavjud va o‗simlik turlari qujayralari uchun bu
nisbatning optimal darajasi ishlab chiqilmagan. Ozuqa muhitida uglevodlar
manbai sifatida saxaroza, glyukoza, fruktoza, galaktoza kabi qand moddalaridan
foydalaniladi. Mikroklonal usulda o‗stirishning turli bosqichlarida uglevodlarga
bo‗lgan talab darajasi ham o‗zgaradi.
O‗stirish jarayoniga ta‘sir qiluvchi fizik omillarga harorat va yorug‗likni
kiritish mumkin. Umumiy holatda o‗stirishning dastlabki ikki bosqichida
yoritilish darajasi muhitda 1000-3000 lk, yoruglik 14-16 soatni tashkil etishi
kerak, biroq bu ko‗rsatkichlar o‗stirilayotgan hujayralar xususiyatlariga ham
bog‗liq bo‗ladi. Yorug‗lik intensivligining normadan biroz oshirilishi ba‘zida
xloroza faollashishiga sabab bo‗ladi va natijada o‗simlikning tuproqqa mosla-
shish jarayoni tezlashadi. Yorug‗likning spektr tarkibi qam o‗stirilayotgan
hujayralarga katta ta‘sir ko‗rsatishi qayd etilgan. N.V.Katayeva, V.A.Avetisov
va boshqalar tomonidan 1981 yilda olib borilgan tadqiqotlarda o‗stirish jara-
yonida hujayralar to‗plamidagi morfogenez jarayoni yuzaga kelishida ko‗k nur
spektri asosiy o‗ringa egaligi kuzatilgan. Qizil yorug‗lik spektri esa tamaki
o‗simligida kurtaklar hosil bo‗lishiga, pomidorda o‗simtalar hosil bo‗lishi va
qayinda ildiz hosil bo‗lishi jarayonlariga ijobiy ta‘sir ko‗rsatishi aniqlangan.
T.N.Konstantinov va uning hamkasblari tomonidan 1987 yilda olib borilgan
tajribalarda
in vitro
sharoitida ko‗k nur spektri tamakida vegetativ kurtaklar
hosil bo‗lishini, qizil nur spektri esa gul kurtaklari hosil bo‗lishini kuchaytirishi
aniqlangan. Biroq bunda ozuqa muhitida auksinlar, sitokininlar miqdori
o‗zgartirilishi vegetativ va gul kurtaklari hosil bo‗lishini o‗zgartirib yuboradi.
R.A.Karnachuk va YE.S.Gvozdev tomonidan 1998 yilda olib borilgan tajriba-
larda bug‗doy o‗simligida kallus to‗qimasi morfogenezi asosan yorug‗lik nuri-
ning yashil rang spektrida kuchayishi qayd etilgan. Muhitning garmon tarkibi
qam hujayralarning o‗sish jarayoniga ta‘sir ko‗rsatadi.
Hujayrani o‗stirishda muhit harorati kunduzi 22-26
0
С, kechasi 18-22
0
С
ni tashkil qiladi. Ba‘zi hollarda haroratning pasaytirilishi hujayralarning o‗sish
jarayoniga ijobiy ta‘sir ko‗rsatadi. Sun‘iy muhitda hujayralarni o‗stirish va
ko‗paytirishda har bir o‗simlikning tabiatda o‗sish sharoiti xususiyatlarini
o‗rganish asosida muhit yaratib berishga ham katta e‘tibor qaratish lozimligi
to‗g‗risida adabiyotlarda ma‘lumotlar mavjudligini ko‗rish mumkin. Muhit va
havoning nisbiy namligi o‗rtacha – 65-70 % ni tashkil qilishi talab etiladi.
Do'stlaringiz bilan baham: |