Введение. Цель, задачи предмета

Ход работы
Процесс культивирования осуществляется в лабораторном термостатируемом ферментере (30^оС) общей вместимостью 5 л (рабочий объем – 3,5 л) при непрерывном перемешивании с интенсивностью 250÷280 об/мин и барботировании воздухом (до 300 л/ч). В качестве питательной среды используется минеральная среда Ридера, в которую в качестве источника углерода вносятся жировые отходы мясокомбинатов. Поддержание заданных значений кислотности среды (рН 5,5÷6,0) осуществляется периодической подтитровкой водным раствором аммиака, который одновременно служит и дополнительным источником азота. При запуске ферментации вводится посевной материал в количестве 3÷5% от рабочего объема ферментера.
Определение накопления биомассы
Рост культуры оценивается путем прямого подсчета в камере Горяева. Расчет количества клеток производят по формуле:
N = 0,25∙n ∙а,
где n – среднее количество клеток в 1 большом квадрате;
a – разведение.
Используя коэффициент пересчета, количество клеток (млн/мл) пересчитывают в массовую концентрацию (г/л):
m = 0,03∙N.
Определение потребления компонентов питательной среды
Потребление субстрата оценивается по снижению содержания ионов аммония в питательной среде. Для чего отобранные из ферментера пробы откручиваются в центрифуге при 5 000 об/мин в течение 10 мин. Затем надосадочная жидкость разводится дистиллированной водой в необходимое количество раз таким образом, чтобы раствор содержал от 1 до 4 мкг/мл ионов аммония. Из полученного разведения отбирается 4 мл пробы, к которым добавляют 80 мкл реактива Нестлера и выдерживают в течение 10 мин (строго). Затем определяют светопоглащение на спектрофотометре при длине волны 440 нм. Содержание ионов аммония рассчитывают следующим образом:
с(NH₄⁺) = D₄₄₀∙8,46,
где D₄₄₀ – оптическая плотность пробы при 440 нм.
Определение изменения липолитической активности культуры
Активность липазы определяют следующим образом. Пробу культуральной жидкости, отобранную из ферментера, откручивают в центрифуге при 5 000 об/мин в течение 10 мин. Затем к реакционной смеси, содержащей 5 мл 40%-й эмульсии оливкого масла в 2%-м поливиниловом спирте, приливают 5 мл надосадочной жидкости. Тест-пробу инкубируют в течение 30 мин при температуре 37^оС, после чего добавляют 10 мл смеси этанол:ацетон (1:1). Степень расщепления оливкового масла определяют, оттитровывая продукты гидролиза раствором гидроокиси натрия (0,05 М NaOH), в присутствии 1 мл 1%-го тимолфталеина, до возникновения голубой окраски. Контрольную пробу обрабатывают аналогично тест-пробе, но не осуществляют инкубирование, то есть после внесения надосадочной жидкости сразу добавляют смесь этанола:ацетон и оттитровывают. Специфическую активность липазы выражают в мкрмоль олеиновой кислоты, освобождающейся за 1 ч при гидролизе субстрата 1 мг биомассы. Расчет удельной липолитической активности (А_{удельная}), в ед.акт./мг биомассы (по сухому весу), производят по формуле:
А_{удельная} = [(V-V_K)∙K]:[t∙V_E∙с],
где V – количество 0,05 М NaОН, израсходованной на титрование тест-пробы, мл;
V_K – количество 0,05М NaОН, израсходованной на титрование контрольной пробы, мл;
К – количество олеиновой кислоты, оттитровываемое 1 мл 0,05 М NaОН (К=50), мкмоль;
t –­ время реакции, ч;
V_E – объем суспензии клеток, добавляемой к реакционной смеси, мл;
с – концентрация биомассы (по сухому весу), мг/мл.
Расчет общей липолитической активности (А_общая) осуществлялся по формуле:
А_общая = А_{удельная}∙с,
где с – концентрация биомассы в культуральной жидкости, мг/мл.
Перед беседой с преподавателем необходимо составить отчет по следующей схеме:

2. 
   Название работы.
   
3. 
   Цель работы.
   
4. 
   Условия процесса культивирования (температура, интенсивность перемешивания, расход воздуха, рН среды).
   
5. 
   Характеристика посевного материала.
   
6. 
   Характеристика питательной среды.
   
7. 
   Все расчеты по частям работы.
   
8. 
   Сводная таблица:
   

Отбор проб		Время культивирования	Накопление биомассы		Концентрация ионов аммония, г/л		Липолитическая активность,
дата	время		млн/мл	г/л			Аудельная, ед.акт./мг		Аобщая, ед.акт./мл

9. 
   Графики по накоплению биомассы, потреблению азота (ионов аммония), изменению липолитической активности.
   
10. 
    Характеристики роста культуры (удельная скорость роста, время генерации, продолжительность основных фаз роста).
    
11. 
    Выводы.