«ветеринария» ихтисослиги бўйича олий ўҚув юртлари учун қЎлланма ички юқумсиз касалликлар фанидан

Текширишнинг бориши. Центрифуга пробиркасига 1 мл қон зардоби (плазма) ва унинг устига 3 мл 96%-ли этил спирти солиниб, шиша таёқча билан аралаштирилади. 10 дақиқа давомида 2000-3000 марта/дақиқа айланишда центрифуга қилинади. Эритманинг устки қисми (этил спирти) тукиб ташланади, Чўкмага 5 мл эфир қўшилади, яхшилаб 2 дақиқа давомида шиша таёқча ёрдамида аралаштирилади. Қайтадан 10 дақиқа давомида 2000-3000 марта/дақиқа айланишда центрифуга қилинади. Каротин экстракциясининг эфирли аралашмаси градусли пробиркага қуйиб олинади ва суюқлик ҳажми 5 млга етказилади. Шу вақтнинг ўзида кўк светофильтрда (400-500 нм тўлқин узунлигида) 2 см қалинликдаги кюветада сув қаршисида калориметрланади.
Шунга паралелл равишда бихромат калийнинг ранги бўйича 1 мг% каротинга тўғри келадиган ишчи стандарт эритмаси ҳам калориметрланади.
Ҳисоблаш қуйидаги формула ёрдамида бажарилади:
Е_тн
X = х
1
бу ерда,
Е_тн - тажриба намунасининг экстенцияси; Е_ст- стандарт намунасининг экстенцияси; 1 - мг% га айлантириш коэффициенти.
Эслатма: Қон зардобидаги (плазмадаги) каротин миқдори унинг сақланиш вақтига қараб пасайиб боради, текшириш пайтида шуни эътиборга олиш керак.


Қон зардобидаги ретинолни аниқлаш (Бессей усули, А.А. Анисова модификацияси).
Усулнинг принципи. Кам ишқорий эритувчилар ёрдамида қон зардобидаги А витамини ва каротиннинг ишқорли гидролизи ва экстракцияланиши вужудга келади. Эритманинг ёруғликни ютиши А витаминнинг ультрабинафша нурлар таъсирида парчаланишигача ва парчалангандан кейинги даражаси спектрофотометр билан (А витамин учун 328 нм, каротин учун 460 нм тўлқин узунлигида) улчанади.
Реактивлар: 1) 1 н. (1моль/л) уювчи калийнинг 96%-ли этил спиртидаги эритмаси (1 ҳажм КОН эритмаси +10 ҳажм 96%-ли этил спирти). Реактив ишлатиш олдидан тайёрланади.
2) Ксилол - октан аралашмаси (1:1). Реактивлар кимёвий тоза (х.ч) бўлиши керак ва текширишлар бошланишига бир неча соат қолганда тайёрланади. Зарур ҳолларда ксилол қайта ҳайдалади.
3) 11 н. (11 моль/л) уювчи калий эримаси. 117,2 уювчи калий моддаси улчов колбасида дистилланган сув билан 1 л лик белгигача етказилади.
Аппаратуралар. Спектрофотометр (СФ-4, СФ-4А, СФ-16 ва б.) симоб кварцли лампа (ПРК), стол вентилятори, сув ҳаммоми, перикс шишасидан тайёрланган тиқинлар (55 х 8 мм), суюқлик тортиш учун резина балончали ёки шприцли пипеткалар.