Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Реактивы и оборудование: 
Свежий растительный материал (морковь или картофель), перманганат 
калия (0,1 н.), пероксид водорода (0,1 н.), серная кислота (10 %), карбонат 
кальция­. Бюретки для титрования на 50 мл, пипетки на 5, 20, 25 мл, мерные 
цилиндры­ на 10 и 25 мл, колбы мерные на 100 мл, колбы конические на 200 мл, 
фарфоровые­ ступки с пестиком, кварцевый песок. 
Ход работы: 
1. 
 
Приготовление препарата каталазы. 2 г сырого картофеля
 
(или моркови) растирают с кварцевым песком в ступке, постепенно добавляя 
2–3 мл воды. Для уменьшения кислой реакции на кончике шпателя добавля-
ют карбонат кальция до прекращения выделения пузырьков углекислого газа. 
Растертую­ массу количественно переносят в мерную колбу и доводят водой 
до 100 мл. Смесь оставляют на 30 минут, после чего фильтруют. 
2. Ферментативный катализ. В две конические колбы помещают по 25 мл 
0,1 н. раствора пероксида водорода, затем в первую добавляют 20 мл вытяж-
ки фермента (опыт), во вторую — 20 мл инактивированного ферментативного 
раствора­ (контроль). Для чего вытяжку каталазы кипятят в течение 5 минут. 
Обе колбы оставляют на 30 минут при комнатной температуре. 
3. Титрование. По истечении времени инкубации приливают в обе колбы 
по 5 мл 10 % раствора серной кислоты и титруют содержимое колб 0,1 н. рас-
твором перманганата калия до образования устойчивого в течение 1 минуты 
розового окрашивания. Отмечают количество перманганата калия, 
пошедшего на титрование оставшегося пероксида водорода в опытной и 
контрольной пробах. 
4. Расчет. По результатам эксперимента проводят расчет. По разности меж­ 
ду контрольным (V, мл) и опытным (V, мл) титрованием находят количество 
перманганата калия, эквивалентное количеству разложенного ферментом пе­ 
роксида водорода. Количество разложенного пероксида водорода (С) находят 
умножением полученной цифры на 1,7 мг (см. уравнение). 
Далее по количеству разложившегося пероксида водорода определяют ак­ 
тивность, рассуждая следующим образом. В 1 г картофеля (или моркови) со­ 
держится количество каталазы, способное за 30 минут разложить: 
С×100 / 20×2
пероксида водорода, где С — количество разложившегося пероксида водорода 
(мг); 100 мл — объем приготовленной вытяжки фермента, 20 мл — объем вы-
тяжки фермента, взятой для реакции, 2 г — количество биоматериала. Затем 
полученную цифру делят на 30 и находят количество разложившегося перок-сида 
водорода­ за 1 минуту (мг / мин). Поскольку активность фермента опреде-ляют, 
как правило, в мкмоль, то полученную величину делят на 0,034 мг и по-лучают 
активность­ каталазы в мкмоль / мин. 
68 

---