Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Реактивы и оборудование: 
Дрожжевая сахароза; сахароза (0,5 %); 0,1 М фосфатный буфер: к 61,0 мл 
0,2 М раствора Na
2
HPО
4
приливают 39 мл 0,2 М раствор NaH
2
PО
4
и доводят 
объем дистиллированной водой до 200 мл; препарат слюны; крахмал (0,5 %); 1 % 
раствор йода в 3 % растворе йодида калия, реактив Фелинга: готовят два 
раствора. А. 134,6 г медного купороса в 500 мл раствора. Б. 173 г сегнетовой соли 
и 70 г гидроксида натрия в 500 мл раствора. Растворы хранят отдельно. Перед 
употреблением смешивают равные объемы растворов А и Б; препарат уреазы 
(см. работу 13); мочевина (5 %); тиомочевина; 1 % спиртовой раствор 
фенолфталеина. Стеклянные стаканы, воронки, мерные цилиндры на 20 мл, 
штативы с пробирками, пипетки на 1 и 5 мл, бумажные фильтры, фарфоро­ вые 
ступки с пестиком, кварцевый песок, термостат, спиртовки. 
Специфичность действия сахаразы и амилазы 
Сахараза и амилаза — ферменты, относящиеся к классу гидролаз, под-
классу гликозидаз, т. е. ускоряют реакции гидролитического расщепления 
сахаров. Гликозидазы высокоспецифичны как к сахарному фрагменту, так и к 
характеру гликозидной связи α или β. Таким образом, гликозидазы облада-ют 
ярко выраженной­ пространственной специфичностью. Сахараза относится к 
β-гликозидазам и способна ускорять разрыв β-гликозидных связей в олиго-- 
сахарах, амилаза — к α-гликозидазам и расщепляет α-гликозидные связи в 
полисахаридах­. 
66 

---

Ход работы: А.
 
Приготовление препарата сахаразы. 2 г прессованных
 
или 
высушенных на воздухе дрожжей растирают в течение 20 минут с 4 г кварцевого­ 
песка и 5 мл фосфатного буфера (0,1 М, pH 7,0), затем добавляют 20 мл буфера­, 
нагретого до 60 °С. Через 30 минут фильтруют через складчатый бумажный­ 
фильтр. Фильтрат должен быть прозрачным, для чего первые порции мутного­ 
фильтрата снова выливают в воронку для фильтрования.