Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Б.
 
В две пробирки наливают по
 
3 мл
 
0,5 %
 
раствора крахмала и прибавля-
ют в первую пробирку 1 мл раствора слюны (амилаза), во вторую — 1 мл пре-
парата сахаразы, перемешивают и ставят в термостат при температуре 38 °С. 
В
две другие­ пробирки наливают по 3 мл 0,5 % раствора сахарозы и в первую 
пробирку 1 мл препарата сахаразы, во вторую — 1 мл раствора слюны и поме-
щают в термостат­ при 38 °С. Через 5 минут в первые две пробирки с крахма-лом 
добавляют по 5 капель раствора йода. В пробирке с амилазой наблюдают красно-
бурое или желтое окрашивание, в другой пробирке — синее окрашивание. В 
пробирке с раствором сахарозы действие фермента обнаруживают с помощью 
реактива Фелинга. В пробирки прибавляют по 1 мл реактива Фелинга
и
нагревают до кипения­. Сахароза не обладает восстановительными свой-
ствами, и поэтому в пробирке с амилазой изменения окраски не наблюдается. 
В
пробирке с сахаразой (β-гликозидазой) произошло расщепление сахарозы 
и
наблюдается красное окрашивание­. По результатам опыта делают вывод 
о
специфичности амилазы и сахаразы. 
Специфичность действия уреазы 
Уреаза — фермент, относящийся к классу гидролаз, подклассу амидаз, т. е. 
ускоряет гидролиз амидных связей. Уреаза обладает абсолютной специфично­ 
стью и способна гидролитически расщеплять амидные связи только в моче-
вине (NH
2
—CO—NH
2
), незначительные изменения в структуре субстрата 
(NH
2
—CS—NH
2
) приводят к тому, что фермент не оказывает действия на 
этот субстрат. 
Ход работы: 
В две пробирки наливают по
 
5 мл препарата уреазы и по
 
5 
капель­ раствора фенолфталеина. В одну из них добавляют 1 мл 5 % раствора 
мочевины­, а в другую — 1 мл 5 % раствора тиомочевины. Обе пробирки 
оставляют на 20 минут при комнатной температуре. Содержимое пробирки с 
мочевиной окрашивается в розовый цвет вследствие образования аммиака 
при расщеплении­ мочевины. Тиомочевина под действием уреазы не 
расщепляется, поэтому раствор во второй пробирке не окрашивается. По 
результатам опыта делают вывод о специфичности действия уреазы. 
Метод основан на определении количества пероксида водорода, оставшего 
ся после действия на него каталазы, титрованием раствора перманганата 
калия в кислой среде. Реакция протекает по уравнению: 
67 

---

2KMnO
4
+ 5H
2
O
2
+ 3H
2
SО
4
→ 2MnSО
4
+ K
2
SO
4
+ 8H
2
O + 5O
2 
1 мл 0,1 н. раствора перманганата калия соответствует 1,7 мг пероксида во-
дорода.