С. А. Эгамбердиева молекуляр

 § 13. ДНК амплификацияси. Полимераза занжир реакцияси
Полимераза занжир реакцияси (ПЗР) – бу in vitro шароитида 
кўп сонли специфик нуклеотид кетма-кетликлари нусхаларини 
олишнинг самарали усули. Уларнинг амплификацияси – баъзан 
миллион марталаб – уч босқичли циклик жараён мобайнида амалга 
оширилади. ПЗР учун зарур: 1) кетма-кетлик-нишонни ён томондан 
жойлашган 
қарама-қарши 
занжирлардаги 
ДНК 
соҳаларига 
комплементар иккита синтетик олигонуклеотид праймер (узунлиги 
20 тадан нуклеотидлар); уларнинг 3ʹ-гидроксил учларини ДНК билан 
тиклангандан (отжигдан) кейин бир-бирига қараши кўзда тутилиши 
лозим; 2) узунлиги 100 ̴ 35 000 н.ж.гача бўлган ДНК-нишон; 3) 95
0 
ва 
ундан юқори ҳароратда ўз фаоллигини йўқотмайдиган термостабил 
ДНК-полимераза; 4) тўртта дезоксирибонуклеотид. 
Типик ПЗР-амплификация қуйидаги уч реакциянинг кўп 
маротаба такрорланишидан иборат. 
1.
Денатурация. 
ПЗР биринчи босқичи ДНК намунасини 95
0
С 
ҳароратда ҳеч бўлмаганда 1 дақиқа давомида ушлаб туриб иссиқлик 
билан денатурациялашдан иборат. Реакцион аралашмада ДНКдан 
ташқари ортиғи билан иккита праймер, 
Thermus aquaticus
бактериясидан ажратиб олинган термостабил ДНК-полимераза 
Tag, 
ва тўртта дезоксирибонуклеотид мавжуд бўлади.
 
2.
Ренатурация
. Аралашма ҳарорати 55
0
С гача секин 
пасайтирилади, бунда праймерлар ДНК комплементар кетма-
кетликлари билан жуфтлашадилар.
 
3.
Синтез
. Ҳарорат 75
0
С гача оширилади – бу ДНК-
полимераза 
Tag
учун оптимал катталик. ДНКнинг праймер 3ʹ-
гидроксил гуруҳи билан инициацияланадиган комплементар занжири 
синтези бошланади (расм.13.1). 
 
Барча реакциялар термостатга қўйилган пробиркаларда олиб 
борилади. Ҳарорат режимини ўзгартириш ва уни ушлаб туриш 
автоматик тарзда амалга оширилади. Ҳар бир цикл одатда 3-5 дақиқа 
давом этади. 
ПЗР давомида ДНК муайян сегментининг амплификацияси 
айнан қай йўсинда содир бўлишини тушуниш учун барча 
праймерларнинг ҳолати ва уларга комплементар бўлган кетма-
кетликларни хар бир раундда аниқ тасаввур қилиш зарур. Биринчи 
раундда янги синтезланган занжирларнинг ҳар бири “унинг” 

---

85 
праймерининг 
3ʹ-гидроксил 
гуруҳидан 
иккинчи 
праймерга 
комплементар бўлган кетма-кетликнинг охирги нуклеотидигача 
бўлган масофага нисбатан анча катта узунликка эга. Бундай 
занжирлар “узун матрицалар” деб аталади, кейинги бўладиган синтез 
айнан уларда боради (расм. 13.1).