С. А. Эгамбердиева молекуляр

Расм12.7. 
Дидезоксинуклеотидлар 
иштирокидаги занжир 
синтезида праймер 
узайиши. Тўрт 
пробирканинг ҳар бирида 
праймер кетма-
кетлигини ўз ичига олган 
турли узунликдаги 
олигонеуклеотидларнинг 
ноёб тўплами ҳосил 
бўлади. Бунда ДНК 
молекулаларининг тўлиқ 
ўлчамли қандайдир сони 
ҳосил бўлади. dNTP – 
дезоксинуклеозидтрифос
фат
(Глик ва Пастернак 
бўйича) 
Кейин занжирлар ажралишини таъминлаш учун пробиркаларга 
формамид қўшилади, ва тўртта йўналишда (пробиркалар сонига кўра) 
полиакриламид гелида электрофорез ўтказилади. Бу ДНК бир 
занжирли фрагментларини улар узунлиги бўйича ҳатто бир 
нуклеотидга фарқ қилса ҳам ажратиш имконини беради. 
Радиоавтографда ДНК нишонланган фрагментларига жавоб берувчи 
узун чизиқлар тўплами аниқланади. Уларнинг таққосланиши ДНК 
секвенирланадиган сегментининг нуклеотид кетма-кетлигини 
тўғридан-тўғри “ўқиш” имконини беради. 12.8-расмда келтирилган 
мисолда мазкур сегментнинг 5'-учидан бошланган дастлабки олти 
нуклеотиди – бу AGCTGC. Энг “тез” узун чизиқ (гелнинг энг 
пастидаги радиоактив нишонланган фрагмент) энг қисқа фрагментга 

---

81 
мос келади ва ddATP йўлида жойлашади; кейинги узун чизиқлар мос 
равишда ddGTP, ddCTP, ddTTP йўлларида жойлашади ва ҳ.к. 
Кўпчилик радиоавтографларда 250 дан 300 тагача узун чизиқлар аниқ 
ажралиб туради. Праймерли кетма-кетлик клонланган ДНК 
киритилган сайтдан фиксацияланган масофада (10-20 нуклеотид) 
жойлашади ва бу клонланган фрагмент бошланишини осон аниқлаш 
имконини беради. 
Расм.12.8. Дидезокси-усул 
ёрдамида ДНКни 
секвенирлашда олинган