С. А. Эгамбердиева молекуляр

 
Расм.12.5. Одатий 
шароитларда ДНК синтези. 
Навбатдаги 
дезоксирибонуклеотид 
(дезоксирибонуклеозидтри
фосфат; dNTP) матрица 
занжири комплементар 
нуклеотиди билан 
жуфтлашади. Ўсиб 
бораётган занжир охирги 
нуклеотидининг 3'-
гидроксил гуруҳи ва 
бирлашаётган 
нуклеотиднинг α-фосфат 
гуруҳи ўртасида 
фосфодиэфир боғлам ҳосил 
бўлади
. (Глик ва Пастернак 
бўйича) 
ДНК репликацияси вақтида занжирнинг узайиши навбатдаги 
нуклеозидтрифосфатнинг 
ўсиб 
бораётган 
занжир 
охирги 
нуклеотидининг 3ʹ-гидроксил гуруҳига бирлашиши натижасида 
содир бўлади (расм 12.5). Ва агар бундай навбатдаги бирлашадиган 
звено дидезоксинуклеотид бўлса, у ҳолда ДНК синтези тўхтайди, 
чунки навбатдаги нуклеотид фосфодиэфир боғламини ҳосил қила 
олмайди (расм 12.6). 

---

79 
Расм 12.6. 
Дидезоксинуклеотиднинг 
ўсиб бораётган 
занжирнинг учига 
бирлашишидан кейин 
ДНК синтезининг 
тўхташи. 3'-гидроксил 
гуруҳ йўқлиги туфайли 
охирги 
дидезоксинуклеотид ва 
навбатдаги нуклеотид 
ўртасида фосфодиэфир 
боғлам ҳосил бўлмайди
. 
(Глик ва Пастернак 
бўйича)
 
ДНК синтезининг тўхтатилиши – бу дидезокси-усулнинг 
асосий босқичи, лекин секвенирлашни тўлиқ амалга ошириш учун, 
бутун бир қатор шартларни бажариш зарур. Турли пробиркаларда 
секвенирлаш учун бир вақтнинг ўзида ДНК синтезининг ҳар бирида 
тўртта дидезоксинуклеотидлардан бири иштирок этган тўртта 
реакцияси ўтказилади. Реакция маҳсулотлари гель-электрофорез 
ёрдамида 
ажратилади, 
радиоавтография 
ўтказилади 
ва 
радиоавтографдан ДНК синтезланган фрагментининг нуклеотид 
кетма-кетлиги “ўқиб чиқилади”. 
Дидезоксисеквенирлаш 
жараёнининг 
биринчи 
босқичи 
киритилган вставка билан ёнма-ён бўлган, клонловчи вектор 
занжирларидан бирининг специфик қисмига эга бўлган, узунлиги 17-
20 звенодан иборат синтетик олигонуклеотид гибридизациясидан 
ташкил топган. Ушбу олигонуклеотид синтез инициацияси учун 3'-
гидроксил гуруҳини етказиб берувчи праймер ҳисобланади. 
Таркибида праймер бор эритма ҳар бирида тўртта дезоксинуклеотид 
dATP, dCTP, dGTP ва dTTP (улардан бири – изотоп билан 
нишонланган) ва тўртта дидезоксинуклеотидлардан (ddATP, ddCTP, 
ddGTP ёки ddTTP) бири бўлган тўртта пробиркага тақсимланади.
Ҳар бир дидезоксинуклеотиднинг концентрацияси шундай 
танланадики, дидезоксинуклеотид ўсиб бораётган занжирнинг фақат 
унга биринчи бўлиб учраган позицияси бўйичагина эмас, балки барча 

---

80 
позициялари бўйича киритилган бўлиши керак. (Эслатиб ўтамиз, 
дидезоксинуклеотид бирлашгандан кейин занжирнинг ўсиши дарҳол 
тўхтайди, шу сабабдан ҳар бир занжир 3'-дидезоксинуклеотид билан 
тугайди.) ДНК-полимераза иштирокидаги ферментатив синтез 
якунида ҳар бир пробиркада ҳар бири праймерли кетма-кетликка эга 
бўлган олигонуклеотидларнинг ноёб тўплами мавжуд бўлади (расм 
12.7).