Ўзбекистон республикаси олий ва ўрта махсус таълим вазирлиги Қарши давлат университети

§2.4. Trichoderma harzianum 22 штаммининг алкалоидлари ва терпеноидларини ажратиш
ЎзР ФА Микробиология институтида ўсимлик резорферасидан ажратиб тозаланган Trichoderma harzianum 22 штаммларининг культурал хусусиятлари ўрганишда уларнинг Петри ликобчаларида колонияларини ўстириш жараёнида тадқиқ этилди. Штаммларнинг колонияларини ўстириш Чапек, Мандельс ва суслоли агар озуқа муҳитларида 35, 45 ва 55^○С ҳароратда 60–72 соат мобайнида давом этди.
Қаттиқ фазали ўстириш стерилланган, 60 % гача намликка эга бўлган буғдой ўсимталарида олиб борилди. Стерилизация 1 соат давомида 1 атм босимда олиб борилди. Экиш материали сифатида замбуруғ штаммининг конидияли ва мицелияли суспензиясидан фойдаланилди. Титри 1·10⁶спора/мл га тенг бўлган 50 мл суспензия 500 г субстрат учун қўлланилди. Ўстириш 3–5 сутка давомида 30^○С ҳароратда олиб борилди. Буғдой ўсимталарида ўстирилган замбуруғ биомассаси сув билан 1:10 нисбатда сув билан суюлтирилди. Шу тарзда олинган биомасса суспензияси 10л Мандельс озуқа муҳитида 14 кун давомида качалкада ўстирилди. Ўстирилган биомассаси культурал суюқликдан ажратилганда 30,83 гр ни ташкил қилди. Фильтрланган 30,83 гр замбуруғ биомассасини 150 мл эфир солинган 500 мл колбага жойлаштирилди ва колбанинг оғзига қайтарма совиткич ўрнатилиб 40-45⁰С гача сув ҳаммомида қиздирилади. Замбуруғ биомассасини экстракция қилиш жараёни уч марта такрорланди ва 3,6 гр экстракцион сумма олинди. Қолган сувли қисмига хлороформ билан экстракция қилинди ва экстракт вакуум роторли ускуна билан қуритилганда 0,93 гр экстракцион сумма ҳосил бўлди. Экстракцион сумманинг умумий оғирлиги 4,53 гр ни ташкил этди (2.7-жадвал).
2.7-жадвал
Trichoderma harzianum 22 замбуруғининг иккиламчи метаболитларининг миқдорий анализ натижалари

Мицеллани ўсиш вақти (кун)	Культурал суюқлик ҳажми (мл)	Экстракцион сумма (гр)	Мицелла биомассаси (гр)	Экстракцион сумма (гр)	Экстракцион сумма (гр)
3	10 000	0,24	8,21	0,54	0,78
7	10 000	0,56	16,32	1,45	2,01
14	10 000	0,93	30,83	3,60	4,53
20	10 000	0,85	30,88	2,56	3,41

Trichoderma harzianum 22 замбуруғларининг иккиламчи метаболитларини устунли хроматография ёрдамида идентификациялаганда қуйидаги (2.8-жадвал) иккиламчи метаболитлар ажратиб олинди.