Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Реактивы и оборудование: 
Стандартный раствор пальмитиновой кислоты: 25,6 мг растворяют в 
хлороформе и доводят объем до 100 мл, в 1 мл раствора содержится 0,256 мг 
C
15
H
31
COOH; хлороформ; сыворотка крови; натрий диэтилдитиокарбамат 
(0,1 % раствор в перегнанном н-бутаноле); медный реактив: готовят из 10 
объемов­ 6,45 % раствора Сu(NО
3
)
2
•
3Н
2
О, 9 объемов 1
М раствора три­ 
этаноламина и 1 объема 1
н. раствора уксусной кислоты. Центрифуга, ФЭК, 
пробирки с притертыми пробками, пробирки центрифужные, пипетки на 1, 
5, 10 мл, стеклянные палочки, шприцы. 
Ход работы: 
Берут две пробирки с притертыми пробками:
 
в одну из них
 
вносят 0,5 мл сыворотки крови, в другую — 1 мл стандартного раствора 
пальмитиновой­ кислоты в хлороформе. В опытную пробу приливают 5 мл, а 
в стандарт — 4,5 мл хлороформа и добавляют по 2,5 мл медного реактива. 
Контрольную­ пробу готовят параллельно: к 5 мл хлороформа добавляют 
2,5 мл медного реактива. Пробирки закрывают пробками и встряхивают в 
течение 3 минут. Содержимое переносят в центрифужные пробирки и 
центрифугируют при 3 000 об. / мин. в течение 15 минут. 
Смесь в пробирках разделяется на три слоя: хлороформ, белок, вода. 
Верхнюю (водную) фазу, содержащую избыток медного реактива, удаля- 
ют шприцом, белковую пленку сдвигают стеклянной палочкой на стенки про-
бирок, хлороформный слой с экстрагированными в нем жирными кислотами 
переносят в сухие пронумерованные пробирки, куда добавляют по 0,5 мл 0,1 % 
раствора диэтилдитиокарбамата натрия в бутаноле и перемешивают. Опытную 
и
стандартную пробы фотоколориметрируют на ФЭКе с синим светофильтром 
в
кюветах толщиной 5 мм против контрольной пробы. 
140 

---

Содержание свободных жирных кислот рассчитывают по формуле: