Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Работа 32. Выделение холестерина из мозга и 
качественные реакции на него 
Холестерин легко можно получить из тканей мозга
.
Препарат холестерина 
из мозга получают путем экстрагирования хлороформом
. 
Реактивы и оборудование: 
Мозговая ткань, гипс, хлороформ, серная кислота (конц.), формалин. 
Стеклянные­ воронки, фарфоровые ступки с пестиком, пробирки, 
стеклянные палочки­, пипетки на 1 и 2 мл, стеклянные пластинки. 
Ход работы: А.
 
Выделение холестерина
.
 
Тщательно растирают
 
3
–5 
г
 
мозговой
­
ткани в фарфоровой ступке с 
6
–10 
г гипса до гомогенной ткани
.
Го
-
могенант распределяют тонким слоем стеклянной палочкой или скальпелем на 
стеклянной
­
пластинке и высушивают в сушильном шкафу 
(60 °
С
). 
Высушенную гомогенную массу соскабливают со стекла и мелко 
измельчают в ступке
,
затем переносят в пробирку
.
К сухому порошку в 
пробирке добавляют 
5
–6 
мл хлороформа и экстрагируют в течение 
5
–
10
минут
.
Полученный экстракт в хлороформе фильтруют в сухую пробирку и 
используют для проведения качественных реакций на холестерол
. 
Б.
 
Реакция Шиффа
.
 
В пробирку помещают
 
1 
мл холестерина в 
хлороформе
 
и по стенке пробирки осторожно приливают 
1 
мл 
концентрированной серной кислоты
.
На границе между серной кислотой и 
раствором хлороформа образуется кольцо красного цвета
. 
В.
 
Реакция Уайтби
.
 
В сухую пробирку с
 
2 
мл раствора холестерина 
в хлороформе прибавляют 
2 
мл смеси концентрированной серной кислоты 
с
формалином
­ (50 :1)
и встряхивают
.
Верхний слой окрашивается в вишнево
-
красный цвет
,
а нижний 
—
в буро
-
красный
.
Если верхний слой
,
содержащий 
холестерин
,
слить в сухую пробирку и прибавить 
2
–
3
капли уксусного анги
-
дрида
,
то образуется синее окрашивание
,
медленно переходящее в зеленое
.
149 

---