Учебно-методический комплекс ферганский филиал узбекского государственного университета физической культуры и спорта

Цветные реакции на белки и аминокислоты.
Присутствие белка можно обнаружить рядом цветных реакций. Часть этих реакций обусловлена различными химическими группировками, общими для молекул различных белков. К таким реакциям относятся биуретовая (реакция на полипептидную структуру) и нингидриновая (реакция на NH₂ – аминокислоты). Другие реакции связаны с наличием в молекуле белка остатка той или иной аминокислоты и следовательно характерны только для белков, в молекулу которых входит данная кислота. Эти реакции ценны тем, что с их помощью легко составить общее представление о качественном аминокислотном составе исследуемого белка.


Опыт – 1. Биуретовая реакция на полипептидную связь
При добавлении сернокислой меди к сильно щелочному раствору белка, образуется комплексное соединение меди с пептидной группировкой, окрашенное в красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет.
Раствор белка дает сине-фиолетовое окрашивание, а раствор продуктов гидролиза белка розовое или красное окрашивание.
Оборудование: штатив для пробирок, пробирки, пипетки.
Реактивы: раствор белка; 10%-раствор едкого натра (NaOH); 2%-раствор сернокислой меди (CuSO₄).
Ход работы:
В пробирку наливают 2 мл раствора белка, добавляют 2 мл раствора едкого натра и 3-4 капли раствора сернокислой меди. При взбалтывании появляется фиолетовое окрашивание.
Опыт – 2. Нингидриновая реакция на аминокислоты
Нингидриновая реакция характерна для аминогрупп, находящихся в α–положении. Растворы белка, – аминокислот и пептидов при нагревании с нингидрином дают синее или фиолетовое окрашивание. В этой реакции – аминокислоты и пептиды окисляются нингидрином и подвергаются окислительному дезаминированию, декарбоксилированию с образованием аммиака, альдегида и СО₂. Нингидрин восстанавливается и связывается со второй молекулой нингидрина посредством молекулы аммиака, образуя продукты конденсации, окрашенные в синий, фиолетовый, красный, а в случае пролина в желтый цвет.
Химизм нингидриновой реакции следующий:

α-аминокислота нингидрин альдегид аммиак восстановлен
нингидрин


продукт конденсации