Трофимова Светлана Алексеевна, доцент кафедры ботаники и физиологии растений института биологии, экологии и агротехнологий ПетрГУ, кандидат биологических наук рабочая программа дисциплины

2. Беседа по теме занятия

1. 
   Контроль экспрессии генов (на примере lас-оперона).
   
2. 
   Виды изменчивости микробов и факторы их вызывающие. Модификационная изменчивость, ее механизмы и значение.
   
3. 
   Выявление ауксотрофных и антибиотико-резистентных мутантов.
   
4. 
   Репарации поврежденной ДНК, механизм и значение.
   
5. 
   Сходство и различия хромосом и плазмид.
   
6. 
   Классификация и функции плазмид.
   
7. 
   Транспозоны, строение и функции, значение.
   
8. 
   Генная инженерия, ее фундаментальное и прикладное значение.
   
9. 
   Практическое применение методов генетики бактерий в народном хозяйстве, биологии, медицине.
   
10. 
    Полимеразная цепная реакция (ПЦР), ДНК - зонды, их применение.
    
11. 
    Мутагенная активность химических соединений и физических факторов, методы их изучения.
    

3.Самостоятельная работа

1. 
   Провести опыт по передачи устойчивости к стрептомицину у coli. Для постановки опыта необходимо взять:
   

• 
  ДНК, полученную из стрептомициноустойчивой культуры донора;
  
• 
  Стрептомициночувствительную культуру реципиента;
  
• 
  Селективную питательную среду, содержащую МПА с 100 ЕД/мл стрептомицина.
  

Алгоритм работы:

• 
  Культуру клеток E. coli в объеме 1 мл соединить с равным количеством ДНК культуры донора и выдержать смесь в термостате при 37°С в течение 30 мин для контакта;
  
• 
  Посекторно произвести посев: 1. Культуру трансформанта на элективную питательную среду со стрептомицином (опыт); 2. культуру реципиента (контроль); 3. культуру донора (контроль);
  
• 
  Учесть результаты посева по готовому опыту, данные занести в таблицу:
  

Cелективные свойства	Донор ДНК E. coli	Реципиент E. coli	Опыт E. coli
Отношение к стрептомицину

2.Провести опыт по передачи маркеров «pro, leu, thr» в скрещивании типа Hfr × F^- у E.coli. Для постановки опыта необходимо взять:

• 
  E.coli (Hfr- донор) с генотипом: pro+ (пролин), leu+ (лейцин), thr+ (треонин), str^s (стрептомициночувствительный);
  
• 
  E.coli (F^—реципиент) с генотипом: pro^- (пролин), leu^- (лейцин), thr^- (треонин), str^r (стрептомицинорезистентный);
  
• 
  Минимальную питательную среду, содержащую ГМС с 100 ЕД/мл стрептомицина.
  

Алгоритм работы:

• 
  В опытную пробирку в соотношении 1 : 10 внести культуру донора (0,1 мл) и реципиента (0,9 мл);
  
• 
  Культуральную смесь поставить в термостат при 37°С и выдержать 30 минут. В течение этого времени проксимальные маркеры донора (pro, leu, thr) входят в бактерию реципиент.
  
• 
  Посекторно произвести посев: 1. Культуру конъюганта на ГМС со стрептомицином (опыт); 2. Культуру реципиента (контроль); 3. Культуру донора (контроль);
  
• 
  Учесть результаты посева по готовому опыту, данные занести в таблицу:
  

Cелективные свойства	Донор E. coliHfr-	Реципиент E. coli F^--	Опыт E. coliHfr × F^-
Отношение к стрептомицину
Прототрофность по pro+, leu+, thr+

3.Провести опыт по передачи «lac» маркера у сoli с помощью бактериофага. Для постановки опыта необходимо взять:

• 
  Культуру Е. colilac^- реципиент;
  
• 
  Умеренный трансдуцирующий бактериофаг, выделенный из лизогенной культуры донора Е.colilac+ путем индукции УФ лучами;
  
• 
  Дифференциально-диагностическую питательную среду Эндо с лактозой.
  

Алгоритм работы:

• 
  К 1 мл часовой культуры реципиента (colilac^_) добавить 1 мл суспензии трансдуцирующего бактериофага. Смесь выдержать в термостате при 37°С в течение 30 минут;
  
• 
  Посекторно произвести посев: 1. Культуру трансдуцента на Эндо с лактозой (опыт); 2. культуру реципиента (контроль); 3. суспензию донора (контроль);
  
• 
  Учесть результаты посева по готовому опыту, данные занести в таблицу:
  

Cелективные свойства	Донор трансдуцирующий бактериофаг	Реципиент E. colilac^-	Опыт E. colilac +
Сбраживание лактозы