Трофимова Светлана Алексеевна, доцент кафедры ботаники и физиологии растений института биологии, экологии и агротехнологий ПетрГУ, кандидат биологических наук рабочая программа дисциплины

3.Самостоятельная работа

1. 
   Методы выделения и культивирования вирусов
   

• 
  Ознакомиться с методами заражения куриных эмбрионов вируссодержащим материалом (демонстрация);
  
• 
  Изучить характер изменения хорионаллантоисной оболочки при культивировании в курином эмбрионе вируса осповакцины;
  
• 
  Разобрать питательные среды, солевые растворы, применяемые в вирусологии;
  
• 
  Изучить характер роста вирусов в культуре ткани. Промикроскопироватьпрепараты тканевой культуры зараженной и не зараженной вирусом. Отметить характерные изменения в клетках (ЦПД).
  
• 
  Изучить пробу Дульбекко - бляшкообразование (демонстрация);
  
• 
  Выполнить индикацию вирусов в реакции гемагглютинации (РГА): под влиянием некоторых вирусов эритроциты животных и человека могут агглютинироваться. Мукопротеиновые рецепторы эритроцитов связываются с гемагглютининами вирусов, в результате чего наблюдается склеивание эритроцитов и выпадение их в осадок (в виде зонтика). РГА не специфична. Она устанавливает факт присутствия вируса в исследуемом материале. Для постановки РГА на часовое стекло или в лунки вносят вируссодержащий материал и каплю 5% взвеси куриных эритроцитов, перемешивают и наблюдают в течении 3-5 минут ПР наличии вируса, обладающего гемагглютинирующей способностью, в исследуемом материале можно наблюдать феномен склеивания эритроцитов.
  

1. 
   Методы выделения и титрования бактериофагов
   

• 
  Титрование по Аппельману: предварительно в колбу с МПБ выполняют посев культуры белого стафилококка при 37 градусов С на 3-4 часа; В колбу с 3-4 часовой культурой белого стафилококка вносят стафилококковый бактериофаг и выдерживают в термостате при температуре 37 градусов С 18-20 часов; Содержимое колбы отфильтровывают через бактериальный фильтр Зейтца. 10-20 мл стафилококкового бактериофага, находящегося в колбе Бунзена переносят стерильной пипеткой в стерильную пробирку и используют для титрования по схеме.
  

Схема титрования по Аппельману

Ингредиенты	Опыт				Контроли
	1	2	3	4	5 МПБ	6 бактериофага	7 стафилококка
МПБ, мл	4,5	4,5	4,5	4,	4,5	4,5	4,5
Бактериофаг, мл	0,5	0,5^-1	0,5^-2	0,5^-3	-	0,5	-
Стафилококк, мл	2,0	2,0	2,0	2,0	-	-	2,0

• 
  Лизирующее действие бактериофага: для оценки действия бактериофага на агаризованных средах по Отто (фаголизабильность) на чашку Петри с 2% МПА шпателем сеют "газоном" чистую культуру стафилококка; На посев стафилококка наносят каплю стафилококкового бактериофага, чашку ставят вертикально и дают капле растечься на поверхности среды; Чашки посевами ставят в термостат на 24 ч.
  
• 
  Титрования бактериофага по Грациа (разбор)
  
• 
  Реакция нарастания титра фага (разбор)