С. А. Эгамбердиева молекуляр

Desulfovibrio desulfuricans 
ДНКси 
Hin
dIII-фрагментлар ўрнатилди ва 
у 
билан 
Е.coli
ҳужайралари 
трансформацияланди
. 
Трансформацияланган ҳужайралардан ажратиб олинган плазмида 
ДНКсига 
Dde
I рестриктазаси билан ишлов берилди
. 
Метилирловчи 
фермент генини ташувчи ва экспрессияловчи плазмидалар 
парчаланмади, чунки pBR322 даги барча саккиз таниб олиш 
Dde
I 
сайтлари метилирланган бўлган. 
Dde
I билан ишлов берилган 
плазмидалар 
аралашмасидан 
E.coli 
трансформациясида 
фойдаланилди
. Dde
I функционал модификацияловчи генни ташувчи 
трансформантлар ҳосил бўлишини фақат плазмид ДНКнинг бус-
бутун халқали молекулалари таъминлади. Қолган плазмидалар 
рестрикция эндонуклеазаси томонидан парчаланди. Қайси клонларда 
модификация ферменти гени ҳам ва рестрикция эндонуклеазаси гени 
ҳам мавжудлигини аниқлаш учун трансформантлар 
Dde
I фаол 
рестриктаза борлигига текширилди
. 
Тавсифланган ёндашувдан ҳар 
қандай рестриктаза генини ажратиш учун муваффақият билан 
фойдаланиш мумкин, фақат у мос келувчи модификацияловчи 
фермент генига етарлича яқин жойлашиши ва мазкур фермент учун 
ҳеч бўлмаганда битта танлаб олиш сайтига эга бўлган плазмида 
векторига киритилиши керак. 
Рекомбинант 
ДНК 
технологиясидан 
фойдаланиб, 
микроорганизмлар метаболизмини уларга янги генлар киритиб ёки 
борларини модификациялаб мақсадли ўзгартириш мумкин. Бундай 
ўзгаришларнинг асосий мақсади янги ферментатив фаолликка эга, 
мавжуд субстратни одатда фақат кимёвий ва микробиологик 
усулларни биргаликда қўллаб олинадиган қимматли маҳсулотга 
айлантира олиш хусусиятига эга рекомбинант микроорганизмларни 
яратишдан иборат. 
Ҳозирги вақтда ичак таёқчаси (
E.coli
) инсулин ва соматотропин 
каби муҳим гормонларни етказиб берувчига айланди. Илгари 
инсулин ҳайвонларнинг ошқозон ости безидан олинар эди, шунинг 
учун унинг нарҳи жуда қиммат бўлган. 100 г кристал инсулин олиш 
учун 800-1000 кг ошқозон ости бези талаб этилади, бир сигирнинг 
ошқозон ости бези 200-250 грамм оғирликка эга. Бу инсулиннинг 

---

99 
жуда қиммат бўлишига ва диабет билан хасталанган беморларнинг 
кенг доираси учун эришиш қийин бўлишига сабаб бўлди. 1978 йилда 
"Генентек" компанияси тадқиқотчилари биринчи марта ичак 
таёқчасининг махсус конструкцияланган штаммидан инсулин олишга 
муваффақ бўлишди. Инсулин 20 ва 30 аминокислота узунлигига эга 
иккита А ва В полипептид занжирлардан ташкил топган. Улар 
дисульфид боғламлар билан бирлаштирилганда натив икки занжирли 
инсулин ҳосил бўлади. Унинг таркибида 
E.coli
оқсили, 
эндотоксинлар ва бошқа аралашмалар йўқ ва ҳайвонлар инсулини 
каби ножўя самаралар бермайди, биологик фаоллиги бўйича эса 
ундан фарқ қилмайди. Пировардида 
E.coli
ҳужайраларида 
проинсулин синтези амалга оширилди, бунинг учун РНК 
матрицасида тескари транскриптаза ёрдамида унинг ДНК-нусҳаси 
синтезланди. 
Олинган инсулин тозалангандан кейин у парчаланди ва натив 
инсулин олинди, бунда экстракция ва гормонни ажратиш босқичлари 
минимумга келтирилди. 1000 литр культура суюқлигидан чўчқа ёки 
сигирнинг 1600 кг ошқозон ости безидан олинган инсулинга 
эквивалент миқдорда 200 граммгача гормон олиш мумкин. 
Соматотропин – гипофиз томонидан ишлаб чиқариладиган 
инсон ўсиш гормони. Бу гормоннинг етишмаслиги гипофизар 
паканаликка олиб келади. Агар соматотропин 1 кг тана вазнига 10 мг 
миқдорида ҳафтасига уч марта юборилса, паканалик билан 
хасталанган боланинг бўйи бир йилда 6 см га ўсиши мумкин. Илгари 
у мурда материалидан олинар эди, бир мурдадан охирги фармацевтик 
препаратга қайта ҳисобланганда 4-6 мг соматотропин олинган. 
Шундай қилиб, гормоннинг олиш мумкин бўлган дозаси 
чекланган, бундан ташқари, бўндай усул билан олинган гормон 
таркиби бир хил бўлмаган ва секин ривожланадиган вируслар бўлиши 
мумкин бўлган. "Genentec" компания 1980 йилда кўрсатилган 
камчиликлардан ҳоли бўлган соматотропинни бактериялар ёрдамида 
олиш технологиясини ишлаб чиқди. 1982 йилда инсон ўсиш гормони 
Францияда Пастер институтида 
E.coli 
ва ҳайвон ҳужайралари 
культурасида олинди, 1984 йилдан бошлаб эса СССРда инсулинни 
саноатда ишлаб чиқариш бошланди. Интерферон ишлаб чиқаришда 
E.coli, 
S.cerevisae
(хамиртуруш) 
каби, фибробластлар ёки 
трансформацияланган 
лейкоцитлар 
культураларидан 
ҳам 

---

100 
фойдаланилади. Аналогик усуллар билан шунингдек хавфсиз ва 
арзон вакциналар ҳам олинади. 
Streptomyces
– антибиотиклар олиш учун фойдаланиладиган 
асосий микроорганизмнинг рекомбинант штаммларини яратишда 
шуни эсда тутиш лозимки, трансформация ва трансформацияланган 
ҳужайраларни танлаш ҳаддан ташқари қийин бўлмаслиги лозим. 
Бироқ 
Е. coli
дан фарқли ўлароқ Streptomyces изоляцияланган 
ҳужайралар кўринишида эмас, балки чўзилган мицеллалар 
кўринишида мавжуд бўлади, шунинг учун трансформациядан олдин 
ҳужайра деворини бузиш ва алоҳида протопластларни чиқариб олиш 
зарур (расм 15.2). Бусиз трансформацияланган ҳужайраларни 
трансформацияланмаганларидан фарқлашнинг имкони бўлмайди, 
чунки қаттиқ муҳитда кўриниб турган колониялар индивидул 
ҳужайралардан эмас, балки ҳужайралар гуруҳидан ҳосил бўлади; 
шунга мувофиқ селектив антибиотик иштирокида ўсадиган 
колониялар трансформацияланган ва трансформацияланмаган 
ҳужайралар аралашмасидан иборат.