Практическое занятие №1

пировиноградная кислота + 2,4-ДНФГ → 2,4-динитрофенилгидразон + Н₂О
Образующееся соединение в щелочной среде приобертает коричнево- красную, интенсивность которой прямо пропрциональна содержанию пировноградной кислоты.
Этим методом можно определять пировиноградную кислоту в сыворотке крови или в моче.
Ход работы. 1. Готовят 3 пробирки. В первую (опытную) приливают 1 мл мочи (или 1 мл сыворотки), в две другие (контрольные) приливают по 1 мл дистиллированной воды.
Во все три пробирки добавляют по 0,5 мл 0,1%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина (осторожно, концентрированная соляная кислота!), перемешивают и оставляют стоять на 5 мин.
2. По истечении этого времени прибавляют с помощью мерного цилиндра по 3 мл толуола в каждую пробирку. Пробирки закрывают пробками, обернутыми в фольгу, встряхивают в течение 3 мин и оставляют на столе на 2 мин до четкого появления двух фаз: нижняя – вода, верхняя – толуол.
Верхний слой отсасывают пипеткой с резиновым колпачком в несколько приемов, стараясь не перемешивать слои, и переносят в сухую пробирку. Не нужно стараться перенести весь слой толуола, важно собрать несколько больше 1 мл жидкости.
3. Из собранной жидкости мерной пипеткой отбирают точно 1 мл и переносят в сухую пробирку. Точно так же поступают и с двумя контрольными пробами. К содержимому всех трех пробирок приливают по 2 мл спиртового раствора гидроксида калия с помощью мерного цилиндра. Спустя 10 мин пробы колориметрируют на ФЭКе со светофильтром № 4 в кюветах с толщиной слоя 1 см.
Расчет. Содержание пирувата в пробе определяют по калибровочному графику, а затем для мочи пересчитывают на суточный диурез (т.е. умножают на 1500), получая ответ в миллиграммах на 1500 мл. Если работу выплняли с сывороткой, производят расчет на 1 л сыворотки.

Практическое занятие № 17

Тема: Обмен углеводов. Переваривание углеводов.


4. Цель: Научить студентов методам выделения и обнаружения гликогена печени. Изучить процессы переваривания и усвоения углеводов организмом.


5. Задачи.
После проведения занятия студенты должны:

• 
  Знать строение, функции основных углеводов, поступающих с пищей.
  
• 
  Знать реакции синтеза и распада гликогена в печени и в мышцах и регуляцию этих процессов
  
• 
  Объяснить патогенез заболеваний, связанных с нарушением обмена углеводов (лактоземия, гликогенозы, агликогенозы)