Практическое занятие №1

Лабораторная работа.
«Цитохромоксидаза мышц».
Цитохромоксидаза мышц является заключительным звеном цепи переноса электронов и катализирует перенос электронов на кислород воздуха. По химической природе цитохромоксидаза является медьгемопротеином, т.е. белком, содержащим гем и медь в составе простетической группе. Цитохромоксидаза, как и цитохрома, прочно связана с клеточными структурами. Принцип обнаружения ферментативного действия цитохромоксидазы мышц. Фенилендиамин с α-нафтом в составе индофенольного реактива «Нади» при взаимодействии с мышечной тканью образует продукт окисления и конденсации α-нафтола и n-фенилендиамина, обладающию сине-фиолетовым цветом.
Ход работы. 1. Для получения ферментативного парата 0,3-0,5 г свежей мышцы растирают в ступке с 20-кратным объемом дистиллированной воды, воду осторожно сливают, после чего мышечную кишацу отжимают между листиками фильтровальной бумаги.
2. Отмытую от редуцирующих веществ и водорастворимых ферментов мышечную кашицу делят на две части. Одну часть помещают на фильтровальную бумагу, а другую – в пробирку, добавляют 1 мл дистиллированной воды и кипятят в течение 1 мин. После остывания жидкость осторожно сливают из пробирки, а мышцу стеклянной палочкой переносят на фильтровальную бумагу.
3. На обе порции мышц наносят по 1-2 капли индофенольного реактива «Нади», представляющего собой смесь n-фенилендиамина и α-нафтола. Через 5 – 10 мин на одной порциимышечной кашицы появляется сенифиолетовое окрашивание, обусловленное образовванием инддофенолового синего – продукта окисления и конденсации α-нафтола и n-фенилендиамина:
Эта реакция катализируется цитохромоксидазой мышц. На прокипяченной порции мышечной кашицы окрашивания не появляется вследствие тепловой денатурации фермента.


Практическое занятие № 16.


Тема: Количественное определение пировиноградной кислоты в сыворотке крови и моче.


4. Цель: Обсудить со студентами общие пути катаболизма. Объяснить студентам значение окислительного декарбоксилирования пировиноградной кислоты, как одного из главных метаболитов промежуточного обмена веществ. Обсудить со студентами значение единства процессов, протекающих в общем пути катаболизма и дыхательной цепи.


5. Задачи.
После проведения занятия студенты должны:

• 
  Определять концентрацию пирувата в моче и сыворотке крови, знать клинико-диагностическое значение определения пирувата - основного субстрата общего пути катаболизма;
  
• 
  Закрепить знания о строении и роли АТФ как остовного макроэргического соединения организма;
  
• 
  Уметь использовать знания о биологическом окислении для объяснения механизма дыхания, его связи с питанием и анализа патологических состояний, возникающих при различных гипоксиях.