П. И. Гунькова общая и пищевая микробиология часть I учебное пособие

 – 
наименьший объем воды, в котором обнаружена 
одна кишечная палочка.
 
Для питьевой воды, прошедшей очистку, 
титр кишечной палочки должен быть не менее 300 см
3
; 
• 
коли-индекс
– количество кишечных палочек в 1 дм
3
воды. 
Коли-индекс для питьевой воды должен быть не более 3. 
Колиформные бактерии определяют в воде методом 
мембранных фильтров или бродильным методом.
Бродильный метод. 
Сущность бродильного метода заключа-
ется в посеве определенных объемов исследуемой воды, инкубации 

---

99
посевов при температуре 37 ºС в средах накопления с последующим 
высевом на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний 
и определением наиболее вероятного числа БГКП в 1 дм
3
воды.
 
При исследовании воды централизованного водоснабжения ис-
следуемый материал дважды засевают в три объема: 100, 10 и 1 см
3
. 
Для исследования речной, озерной, прудовой воды готовят десяти-
кратные разведения 1:10, 1:100, 1:1000 и засевают еще 10 см
3
и 1 см
3
без разведения. Посев воды производят в бродильные сосуды (колбы, 
бутылки, пробирки с поплавками), заполненные глюкозопептонной 
средой Эйкмана. Посевы инкубируют в термостате при температуре 
37 ºС в течение 24 ч.
Обработка результатов анализа. 
По окончании инкубации 
посевы просматривают и делают следующие выводы: 
а) при отсутствии газообразования и изменения цвета среды 
дают отрицательный ответ на наличие БГКП в исследуемом объеме 
воды, дающим право закончить исследование через 24 ч; 
б) при образовании кислоты и газа производится высев мате-
риала из бродильных сосудов на среду Эндо. Высев делается бакте-
риологической петлей густым штрихом для получения изолирован-
ных колоний. Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 ºС 
в течение 24 ч. После инкубации посевы просматривают. Отсутствие 
на среде Эндо характерных для кишечных палочек колоний дает ос-
нование на выдачу отрицательного ответа и окончание исследования; 
в) при обнаружении на среде Эндо лактозоположительных 
темно-красных колоний, с металлическим блеском или без него, 
необходимо установить принадлежность выросших микроорганизмов 
к семейству кишечных бактерий. С этой целью производится микро-
скопирование препарата из колоний и постановка
 оксидазного
теста.
Оксидазный
тест предложен для дифференциации бактерий 
семейства 
Enterobacteriaceae
от грамотрицательных бактерий семей-
ства 
Pseudomonodaceae
и других водных сапрофитов, которые, в от-
личие от кишечных бактерий, вырабатывают фермент оксидазу. 
Для постановки оксидазного теста со среды Эндо снимают 
петлей по 2–3 колонии каждого типа. Микробную массу наносят 
штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную специальным 
реактивом (30 г ά-д-нафтола растворяют в 2,5 см
3
этанола, прибавляют 
7,5 см
3 
дистиллированной воды и 40 мг диметил-парафенилендиамина. 
Раствор готовят непосредственно перед определением).

---

100
При отрицательном результате оксидазного теста бумага при кон-
такте с колонией цвета не меняет. Если же бумага синеет в течение 1 мин 
при контакте с колонией, то оксидазный тест считают положительным. 
Наличие в препарате грамотрицательных неспорообразующих 
палочек, не обладающих оксидазной активностью, позволяет немед-
ленно дать ответ о наличии в воде БГКП.
При обнаружении на среде Эндо розовых и бесцветных коло-
ний ведут подсчет и пересевают 2–3 изолированные колонии каждого 
типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. Посевы инкубируют при 
температуре 37 ºС в течение 3–4 ч. При образовании кислоты (изме-
нение цвета среды) и газа, накапливающегося в поплавке, результат 
считается положительным, при отсутствии кислото- и газообразова-
ния – отрицательным. 
После проведения анализа записывают в лабораторный журнал 
окончательные результаты (положительные и отрицательные) по 
каждому засеянному объему и определяют коли-титр и коли-индекс.