Генетика, геномика ва биотехнологиянинг замонавий муаммолари

 
 
АМИНОКИСЛОТНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ФАКТОРА РОСТА 
НЕРВОВ СРЕДНЕАЗИАТСКОЙ ЧЕРЕПАХИ 
 
Тагайалиева Н.А., Давлетчурин Д.Х., Абдурахимов А.А., Адылов Б.Ш.,
Фомина М.А., Салихов Р.С.
Институт биоорганической химии АН РУз им. акад. А.С. Сыдыкова 
100125, Узбекистан, Ташкент, пр. Мирзо Улугбека, 83
[e-mail] 
ВВЕДЕНИЕ: Фактор роста нервов (ФРН) является хорошо 
охарактеризованным регулятором, необходимым для выживания и 
дифференцировки широкого спектра клеток периферической и центральной 
нервной системы. Также известно, что ФРН влияет на зрелые клетки 
иммунной 
системы 
и 
гемопоэтические 
островки, 
способствуя 
восстановлению гемопоэза облученных мышей. Возникший интерес к ФРН 
среднеазиатской черепахи связан с ее феноменальной радиоустойчивостью, 
детерминированной резистентностью стволовых кроветворных клеток. 
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ: Выделение геномной ДНК из крови 
черепахи проводили колоночным методом (К-Сорб «Набор реагентов для 
выделения геномной ДНК на колонках» (Синтол, Россия) согласно 
инструкциям производителя с некоторыми изменениями из-за наличия ядра в 
эритроцитах и тромбоцитах черепахи (уменьшили количество крови в 4 раза, 
увеличили объем лизирующего раствора в 3 раза). На основе 
биоинформатического анализа нуклеотидных последовательностей кДНК 

---

Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г. 
47 
бета-полипептида ФРН ящерицы и морской черепахи (www.ensembl.org), 
представленного 1 экзоном, проведен дизайн праймеров. Выравнивание 
нуклеотидных 
последовательностей 
проводили 
с 
помощью 
Blast 
(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PAGE_TYPE=BlastSearch). 
Праймер для ведущей цепи: 5’-AGGTGCATAGCGTAATGTCCATG-3’, и 
обратной: 3’-CTTAAAATAATTTACAGACTGAGGTAGG-5’. Методом ПЦР в 
конечном объеме 25 мкл амплифицировали кДНК с использованием 2мкл 
геномной ДНК черепахи в качестве матрицы, по 2,5мкл праймеров для 
ведущей и обратной цепи, 0,2мкл Taq полимеразы, 2,5мкл 10х ПЦР буфера, 
2мкл dNTP, 2мкл MgCl
2
и 11,3 мкл ddH
2
O. Образцы подвергались начальной 
денатурации при 95
⁰
С в течение 5мин, затем 40 циклам амплификации, 
каждый из которых состоял из 1мин денатурации при 95
⁰
С, 40сек отжига при 
60
⁰
С, 2мин элонгации при 68
⁰
С, и далее инкубированы при 68
⁰
С в течение 
5мин. Согласно электрофоретическим данным длина ПЦР-продукта 
составила ≈800 пар нуклеотидов. Очистку к
ДНК 
из геля проводили с 
помощью набора BioFlux DNA/RNA Extraction/Purification for BioSpin Gel 
Extraction Kit (Bioer Technology Co., Ltd, Китай) согласно указаниям 
производителей. Секвенирование проводили на фирме Синтол (Москва, 
Россия). 
РЕЗУЛЬТАТЫ: Секвенированная последовательность представлена в 
European Molecular Biology Laboratory, состоит из 762 нуклеотидов, из них 
последовательность самого гена бета-полипептида ФРН среднеазиатской 
черепахи 
Testudo horsfieldii
содержит 705 нуклеотида. Для прогнозирования 
аминокислотной последовательности секвенированного гена проводили 
трансляцию на сайте: www.molbiol.ru/scripts/01_13.html 
с получением 
пептида, состоящего из 235 аминокислот. 
NGF_
 T. horsfieldii
_235 codons: 
MLYYTLIIAFLLGIQAAPKSEDNAPWGFPAGPTIPNILRTKANHVPMAAHR
LAGKVDSRGAGRAANITVDPKLFRKRRFRSPRVLFSTQHPPVLGDRQNME
YLDSADSLNRTIRTKRTAHPVLHRGEFSVCDSVSMWVGDKTTATDIKGKE

---

Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г. 
48 
VTVLGEVNINNNVFKQYFFETKCRDPKPVSSGCRGIDAKHWNSYCTTTHT
FVKALTMEGKQAAWRFIRIDTACVCVLSRKTVRP 
Выравнивание нуклеотидной и аминокислотной последовательностей 
показал высокую сохранность бета полипептида ФРН у представителей 
семейства 
Testudinae: 
только выделенные серым цветом аминокислоты у 
ФРН 
T. horsfieldii
отличаются от таковых у ФРН 
T. graeca.