Генетика, геномика ва биотехнологиянинг замонавий муаммолари

ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ХАРАКТЕРИСТИКА НЕСФАТИН-1 
ИММУНОРЕАКТИВНОСТИ В ЖЕЛУДКЕ КРЫСЫ 
1
Якубов И.Т., 
2
Нилс Ламбрехт, 
2
Сакс Дж. 
1
Учебно-экспериментальный центр высоких технологий
2
Калифорнийский университет (Лос Анжелес, США) 
[e-mail] 
Несфатин-1, полипептид, идентифицированный в 2006 году японскими 
учеными как амино-концевой фрагмент нуклеобиндина 2 (NUCB2), 
состоящий из последовательности 82 аминокислотных остатков, схожих у 
человека, мышей и крыс. Несфатина-1 гипоталамуса отвечает за 
ингибирование потребления пищи в ночное время, и, следовательно, 
препятствует увеличению массы тела у крыс. 
Нуклеобиндин 2 содержит 24 аминокислотный N-концевой сигнальный 
пептид, за которым следует последовательность из 396 аминокислот, которая 
расщепляется конвертазой на три гормона пептидной природы: несфатин-1 
(1-82), несфатин-2 (85-163) и несфатин-3 (166-396), причем, только несфатин-
1 при введении в желудочек мозга крыс подавляет ночное потребление пищи 
и увеличение массы тела у крыс на ночной диете.
Нами была исследована экспрессия гена NUCB2 и распределение 
несфатин-1-иммунореактивных клеток в желудке. Анализ профилей 
экспрессии мРНК микрочипов показал, что наиболее высокая экспрессия 
мРНК NUCB2 наблюдалась в очищенных эндокринных клетках слизистой 
оболочки желудка, и в меньшей степени в клетках мозга и сердца. 
Распределение экспрессии мРНК слизистой оболочки желудка, очищенных 
до 99%-ной чистоты париетальных клеток и очищенных до 95%-ной
чистоты энтерохроммафин-подобных клеток слизистой оболочки на 
олигонуклеотид микрочипах показало значительно высокую экспрессию во 
фракции очищенной энтерохроммафин-подобных клеток (нормализованные 
интенсивности 47547,00±8116,85) по сравнению с слизистой оболочки 

---

Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г. 
62 
желудка (9073,55±3702.32). Экспрессия гена NUCB2 была незначительной в 
париетальных клетках желудка (1825,33±614,56). 
Количественный ПЦР анализ показал высокую экпрессию мРНК NUCB2 
в слизистой оболочке желудка. Содержание мРНК в клетках желудка в 16 раз 
выше по сравнению с мРНК из головного мозга крыс (относительные 
соотношения по сравнению с клетками мозга, для слизистой оболочки 
желудка равна 16,38 ± 0,85; для клеток сердца равна 1,40 ± 0,84). 
Анализ Вестерн-блоттинга растворимых и мембранных белков 
слизистой оболочки желудка, поджелудочной железы и гипофиза с 
использованием антител против несфатин-1, показал наличие нуклеобиндин 
2 белка (50 кДа) во всех белковых фракциях мембран. В растворимых 
фракциях эндокринных клеток слизистой оболочки желудка и тканях 
поджелудочной железы было обнаружено снижение молекулярной массы, 
приблизительно на 3 кДа. В то же время, в растворимой фракции гипофиза 
были обнаружены пептиды такого же размера, что и в мембранной фракции. 
Иммуногистохимическое окрашивание клеток желудка крысы совместно с 
несфатином-1, грелином, гистидиндекарбоксилазой или антителами к 
соматостатину показало наличие двух подтипов несфатин-1-позитивных 
эндокринных клеток. Было обнаружено, что несфатин-1 и грелин совместно 
экспрессируются в клетках средней части желез желудка, в то время как в 
нижней 
части 
желез 
желудка 
несфатин-1 
коэкспрессируется 
с 
соматостатином 
или 
гистидиндекарбоксилазой. 
С 
помощью 
высокоразрешающей конфокальной микроскопии были обнаружены две 
отдельные популяции внутрицитоплазматических везикул этих клеток. Часть 
везикул содержали несфатин-1, а другая - грелин иммунореактивности. Нами 
также было показано, что грелин и несфатин-1 иммунореактивности 
находятся в различных везикулах Х/А-типа эндокринных клеток слизистой 
оболочки желудка. Эти результаты указывают на то, что грелин и 
NUCB2/несфатин-1 могут синтезироваться самостоятельно в зависимости от 

---

Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г. 
63 
метаболических условий, и задействовании соответствующих систем 
передачи внутриклеточных сигналов. 
Нами было показано, что голодание увеличивает экспрессию мРНК 
грелина в желудке. Снижение содержания этого пептида в клетках типа X/А 
и увеличение уровня грелина в плазме после голодания, также указывает на 
увеличение синтеза и секреции грелина. 
Таким 
образом, 
нами 
обнаружена 
селективная 
несфатин-1 
иммунореактивность в желудке, поджелудочной железе, гипофизе и 
семенниках. Во всех других тканях отсутствовали несфатин-1 иммунное 
окрашивание. Слизистая желудка экспрессирует наибольше количество 
NUCB2 по сравнению с другими органами. Большинство грелин-
продуцирующих 
Х/А 
клеток 
желудка, 
также 
экспрессируют 
NUCB2/несфатин-1. 
При 24-часовом голодании у крыс экспрессия мРНК нуклеобиндина 2 в 
эндокринных клетках желудка значительно снижается, что указывает на 
регуляторную роль периферического несфатин-1 в энергетическом 
гомеостазе.