90
помутнение среды и при этом не происходит образования мицелия,
пленок и других скоплений. Питательная среда, в которой культиви-
руют
микроорганизмы, должна быть оптически прозрачной.
Светорассеяние, вызываемое микроорганизмами, выросшими
в питательном бульоне, наиболее удобно измерять с помощью фото-
электроколориметра (ФЭК) или спектрофотометра (СФ)
при длине
волны от 540 до 650 нм, при которой поглощение света данной сус-
пензией является минимальным.
Зависимость между интенсивностью падающего света (
I
0
)
и прошедшего света
I
(т.е. света, не рассеянного культурой) при ма-
лых концентрациях бактерий подчиняется закону Ламберта–Бера:
I
=
I
0
10
–ε
lc
,
где ε – коэффициент экстинкции,
l
–
толщина слоя суспензии,
с
–концентрация бактерий. Из этого соотношения следует:
lg(
I
0
/
I
) = ε
lc
.
График зависимости lg(
I
0
/
I
) от
с
(концентрации бактерий) име-
ет вид прямой, угол наклона которой определяется произведением ε
l
.
Таким образом, изменение оптической плотности, вызываемое изме-
нением концентрации бактерий на одну единицу, зависит от толщи-
ны слоя суспензии
l
и свойств суспензии,
характеризуемых коэффи-
циентом ε.
При высоких концентрациях бактерий закон Ламберта–Бера
теряет свою силу.
Для определения числа бактерий нефелометрическим методом
строят калибровочные кривые зависимости между величиной свето-
рассеяния и числом клеток (или сухой биомассы в единице объема
среды). Для построения калибровочной
кривой измеряют на ФЭК или
СФ величину светорассеяния суспензии с различным содержанием
клеток и в каждой из них определяют количество клеток и биомассы.
Полученную зависимость выражают графически,
откладывая на оси
ординат показания ФЭК, а на оси абсцисс – количество клеток, со-
держащееся в 1 см
3
суспензии, или биомассу в 1 дм
3
культуральной
среды. Для каждого микроорганизма
необходимо строить свою ка-
либровочную кривую.
91
Контрольные вопросы
1. Какие методы определения количества микроорганизмов
в различных объектах вам известны?
2. С какой целью готовят серию разведений исследуемого объ-
екта для определения общего количества микроорганизмов при ис-
пользовании чашечного метода? Что такое КОЕ?
3.
Все ли бактерии, находящиеся в исследуемом продукте,
учитываются чашечным методом?
4. Какие питательные среды используют для определения
в продукте количества бактерий и грибов (дрожжей и плесеней)?
5. Каковы достоинства и недостатки
флуоресцентного метода
подсчета микроорганизмов?
6. В чем заключается сущность метода проточной цитометрии?
7. На чем основан нефелометрический метод определения ко-
личества бактерий или биомассы в суспензии?