П. И. Гунькова общая и пищевая микробиология часть I учебное пособие

10
.4. Метод проточной цитометрии 
Проточная цитометрия (ПЦ) является современной технологи-
ей быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и 
происходящих в ней процессов. Принцип метода ПЦ основан на ре-

---

87
гистрации флюоресценции и светорассеяния от каждой отдельно взя-
той клетки. Клеточная суспензия, предварительно меченная флюо-
ресцентными красителями, под давлением подается в проточную 
ячейку, где за счет гидродинамического фокусирования клетки, 
находясь в ламинарном потоке, выстраиваются в цепочку друг за 
другом. В момент пересечения клеткой лазерного луча высокочув-
ствительные детекторы регистрируют интенсивность ее флюорес-
ценции и рассеянное лазерное излучение. В ходе анализа учитывает-
ся также уровень флюоресценции химических соединений, входящих 
в состав клетки (аутофлюоресценция). Полученный сигнал подается 
в компьютер, обрабатывается, и полученные данные отображаются 
в виде различных графиков или гистограмм. Аппарат для проведения 
ПЦ позволяет определять до 5–10 различных параметров клетки, та-
ких как размер, активность ферментов, содержание белков, ДНК, 
липидов, антигенных веществ.
Метод ПЦ находит самое различное применение, начиная от 
простого подсчета клеток и определения их жизнеспособности и за-
канчивая более сложными исследованиями в иммунологии, онколо-
гии, цитологии, гематологии, фармакологии. 
10.5
. Определение количества микроорганизмов 
методом мембранного фильтрования 
Сущность метода состоит в том, что определенный объем ис-
следуемой пробы (питьевой воды, стойких безалкогольных напитков, 
пастеризованного пива) фильтруют через мембранные фильтры 
с размером пор от 0,15 до 0,25 мкм (см. раздел 10.3). Осевшие на 
фильтре микроорганизмы окрашивают и подсчитывают под микро-
скопом с применением окулярного сетчатого микрометра в несколь-
ких полях зрения на определенной площади препарата. Подсчет чис-
ленности бактериальных клеток в ходе микроскопирования ведется 
одновременно по отдельным морфологическим группам, что дает 
возможность охарактеризовать как состав микробного сообщества, 
так и (после суммирования данных) общую численность микроорга-
низмов в исследуемом объекте.

---

88