Введение. Цель, задачи предмета


Примерная схема титрования комплемента



Download 0,8 Mb.
bet79/94
Sana23.02.2022
Hajmi0,8 Mb.
#181721
1   ...   75   76   77   78   79   80   81   82   ...   94
Bog'liq
Мажмуа Биотехнология2021

Примерная схема титрования комплемента

№ п/п

Комплемент, мл
(1:10)

Физиологический
раствор,мл

Примерные результаты

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
К*

0,005
0,010
0,015
0,020
0,025
0,030
0,035
0,040
0,045
0,050
-

0,295
0,290
0,285
0,280
0,275
0,270
0,265
0,260
0,255
0,250
0,300

++++
+++
++
+
Гемолиз
Гемолиз
Гемолиз
Гемолиз
Гемолиз
Гемолиз
++++

К* – контроль гемолитической системы

Титрование антигена
Для определения рабочей дозы антигена его титруют. Для этого в пробирки отмеривают различные количества изучаемого экстракта. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,1 мл комплемента, разведенного физиологическим раствором таким образом, чтобы в 0,1 мл содержалась его рабочая доза. Пробирки ставят в термостат при 37оС на 1 ч. После этого в каждую пробирку приливают по 0,2 мл гемолитической системы и вновь помещают их на 1 ч в термостат (табл. 3).
За титр антигена принимают максимальное количество антигена, при котором еще наблюдается гемолиз (титр антигена равен 0,01 мл, а рабочая доза – 0,005 мл).
Таблица 3
Примерная схема титрования антигена

№ п/п

Антиген, мл

Физиологический раствор, мл

Примерные результаты

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
К*
К**

0,1
0,08
0,06
0,04
0,02
0,01
0,004
0,002
0,0004
0,0002
-
-

0,1
0,12
0,14
0,16
0,18
0,19
0,196
0,198
0,1996
0,1998
0,2
0,3

++++
++++
+++
++
+
Гемолиз
Гемолиз
Гемолиз
Гемолиз
Гемолиз
Гемолиз
++++

К* – контроль комплемента;
К** – контроль гемолитической системы.
Главный опыт (с одновременным титрованием сыворотки)
Готовят разведения сыворотки: 1:10, 1:20, 1:40, 1:80 и т.д. В пробирки разливают по 0,1 мл сыворотки в соответствующих разведениях, начиная с последней пробирки, содержащей сыворотку в максимальном разведении. Затем в каждую пробирку приливают по 0,1 мл разведенного антигена и по 0,1 мл комплемента, содержащих в этом объеме рабочую дозу. Опыт дополняют контролями разведений сыворотки (0,1 мл каждого разведения сыворотки + 0,1 мл физиологического раствора + 0,1 мл комплемента), контролем антигена (0,1 мл антигена + 0,1 мл физиологического раствора + 0,1 мл комплемента), контролем гемолитической системы (0,3 мл физиологического раствора). Все пробирки встряхивают и помещают на 1 ч в термостат. Затем во все пробирки приливают по 0,2 мл гемолитической системы, пробирки снова встряхивают и помещают в термостат на 1 ч (табл. 4).

Таблица 4


Примерная схема постановки главного опыта

№ пробирки

Разведение сыворотки

Антиген (рабочая доза), мл

Физиологи-ческий раствор, мл

Примерные результаты

1:20

1:40

1:80

1
2 (к)1
3
4 (к)
5
6 (к)
К*
К**
К***

0,1
0,1

0,1
0,1





0,1
0,1

0,1
-
0,1
-
0,1
-
0,1
-
-

-
0,1
-
0,1
-
0,1
0,1
0,2
0,3

++
Гемолиз
+
Гемолиз
Гемолиз
Гемолиз

Гемолиз
Гемолиз


++++

(к)1 – контрольные пробирки;
К* – контроль антигена;
К** – контроль комплемента;
К*** – контроль гемолитической системы.
При наличии специфической реакции антигена с антителом в пробирках, содержащих и сыворотку, и антиген, наблюдается задержка гемолиза (задержка гемолиза наблюдается в пробирках 1 и 3). За титр исследуемой сыворотки принимают максимальное разведение сыворотки, при котором еще происходит задержка гемолиза (титр сыворотки равен 1:40). При отсутствии специфической реакции антигена с антителом наблюдается полный гемолиз во всех опытных пробирках.


Download 0,8 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   ...   75   76   77   78   79   80   81   82   ...   94




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©hozir.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling

kiriting | ro'yxatdan o'tish
    Bosh sahifa
юртда тантана
Боғда битган
Бугун юртда
Эшитганлар жилманглар
Эшитмадим деманглар
битган бодомлар
Yangiariq tumani
qitish marakazi
Raqamli texnologiyalar
ilishida muhokamadan
tasdiqqa tavsiya
tavsiya etilgan
iqtisodiyot kafedrasi
steiermarkischen landesregierung
asarlaringizni yuboring
o'zingizning asarlaringizni
Iltimos faqat
faqat o'zingizning
steierm rkischen
landesregierung fachabteilung
rkischen landesregierung
hamshira loyihasi
loyihasi mavsum
faolyatining oqibatlari
asosiy adabiyotlar
fakulteti ahborot
ahborot havfsizligi
havfsizligi kafedrasi
fanidan bo’yicha
fakulteti iqtisodiyot
boshqaruv fakulteti
chiqarishda boshqaruv
ishlab chiqarishda
iqtisodiyot fakultet
multiservis tarmoqlari
fanidan asosiy
Uzbek fanidan
mavzulari potok
asosidagi multiservis
'aliyyil a'ziym
billahil 'aliyyil
illaa billahil
quvvata illaa
falah' deganida
Kompyuter savodxonligi
bo’yicha mustaqil
'alal falah'
Hayya 'alal
'alas soloh
Hayya 'alas
mavsum boyicha


yuklab olish