Введение. Цель, задачи предмета

Примерная схема титрования комплемента

№ п/п	Комплемент, мл (1:10)	Физиологический раствор,мл	Примерные результаты
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 К*	0,005 0,010 0,015 0,020 0,025 0,030 0,035 0,040 0,045 0,050 -	0,295 0,290 0,285 0,280 0,275 0,270 0,265 0,260 0,255 0,250 0,300	++++ +++ ++ + Гемолиз Гемолиз Гемолиз Гемолиз Гемолиз Гемолиз ++++

К* – контроль гемолитической системы

Титрование антигена
Для определения рабочей дозы антигена его титруют. Для этого в пробирки отмеривают различные количества изучаемого экстракта. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,1 мл комплемента, разведенного физиологическим раствором таким образом, чтобы в 0,1 мл содержалась его рабочая доза. Пробирки ставят в термостат при 37^оС на 1 ч. После этого в каждую пробирку приливают по 0,2 мл гемолитической системы и вновь помещают их на 1 ч в термостат (табл. 3).
За титр антигена принимают максимальное количество антигена, при котором еще наблюдается гемолиз (титр антигена равен 0,01 мл, а рабочая доза – 0,005 мл).
Таблица 3
Примерная схема титрования антигена

№ п/п	Антиген, мл	Физиологический раствор, мл	Примерные результаты
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 К* К**	0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0,01 0,004 0,002 0,0004 0,0002 - -	0,1 0,12 0,14 0,16 0,18 0,19 0,196 0,198 0,1996 0,1998 0,2 0,3	++++ ++++ +++ ++ + Гемолиз Гемолиз Гемолиз Гемолиз Гемолиз Гемолиз ++++

К* – контроль комплемента;
К** – контроль гемолитической системы.
Главный опыт (с одновременным титрованием сыворотки)
Готовят разведения сыворотки: 1:10, 1:20, 1:40, 1:80 и т.д. В пробирки разливают по 0,1 мл сыворотки в соответствующих разведениях, начиная с последней пробирки, содержащей сыворотку в максимальном разведении. Затем в каждую пробирку приливают по 0,1 мл разведенного антигена и по 0,1 мл комплемента, содержащих в этом объеме рабочую дозу. Опыт дополняют контролями разведений сыворотки (0,1 мл каждого разведения сыворотки + 0,1 мл физиологического раствора + 0,1 мл комплемента), контролем антигена (0,1 мл антигена + 0,1 мл физиологического раствора + 0,1 мл комплемента), контролем гемолитической системы (0,3 мл физиологического раствора). Все пробирки встряхивают и помещают на 1 ч в термостат. Затем во все пробирки приливают по 0,2 мл гемолитической системы, пробирки снова встряхивают и помещают в термостат на 1 ч (табл. 4).

Таблица 4

Примерная схема постановки главного опыта

№ пробирки	Разведение сыворотки			Антиген (рабочая доза), мл	Физиологи-ческий раствор, мл	Примерные результаты
	1:20	1:40	1:80
1 2 (к)^1 3 4 (к) 5 6 (к) К* К** К***	0,1 0,1	0,1 0,1	0,1 0,1	0,1 - 0,1 - 0,1 - 0,1 - -	- 0,1 - 0,1 - 0,1 0,1 0,2 0,3	++ Гемолиз + Гемолиз Гемолиз Гемолиз Гемолиз Гемолиз ++++

(к)¹ – контрольные пробирки;
К* – контроль антигена;
К** – контроль комплемента;
К*** – контроль гемолитической системы.
При наличии специфической реакции антигена с антителом в пробирках, содержащих и сыворотку, и антиген, наблюдается задержка гемолиза (задержка гемолиза наблюдается в пробирках 1 и 3). За титр исследуемой сыворотки принимают максимальное разведение сыворотки, при котором еще происходит задержка гемолиза (титр сыворотки равен 1:40). При отсутствии специфической реакции антигена с антителом наблюдается полный гемолиз во всех опытных пробирках.