Введение. Цель, задачи предмета

Техника постановки реакции кольцепреципитации
В пробирки диаметром 5÷7 мм разливают по 0,1 мл иммунной сыворотки. На сыворотку с помощью пастеровской пипетки, у которой предварительно конец оттянут в тонкий капилляр, осторожно по стенке пробирки наслаивают равный объем разведений антигена, начиная с меньших его концентраций.
Обязательно должны быть поставлены контрольные опыты. В первом контроле на нормальную (неиммунную) сыворотку наслаивают антиген во всех взятых разведениях, как и в основном опыте. Этот контроль необходим для исключения реакции нормальных антител сыворотки.
Во втором контроле для исключения влияния концентрации соли на образование преципитата на иммунную и нормальную сыворотку наслаивают буферный раствор, в котором разводился антиген. Это может быть физиологический раствор хлористого натрия или какой-либо буферный раствор, например фосфатный, чаще всего со значением pH 7,2÷7,6.
Реакция кольцепреципитации протекает обычно либо при комнатной температуре, либо в термостате (на водяной бане) при 37÷37,5^оС. Результаты оценивают через 10 и 30 мин по титру реакции, т.е. по наибольшему разведению антигена, где наблюдается образование кольца преципитации, а также по интенсивности реакции. В последнем случае учитывается степень плотности кольца преципитации. Интенсивность оценивают по следующей шкале:

0. 
   ++++ очень плотное кольцо, оседание хлопьев преципитата на дно пробирки;
   
1. 
   +++ плотное кольцо без оседания преципитата;
   
2. 
   ++ ясно видимое кольцо;
   
3. 
   + слабо выраженное кольцо;
   
4. 
   0 – отсутствие реакции.
   

При этом во всех контрольных пробирках реакция должна быть отрицательной.

Реакция преципитации в агаровом геле
Метод диффузионной преципитации в геле позволяет детально изучать состав сложных антигенных смесей, одномоментно определять антигены как общие для ряда тканей, так и специфические только для данной ткани, контролировать эффективность препаративного разделения тканевых антигенов. Но применение этого метода ограничено тем, что с его помощью возможно лишь изучение водорастворимых антигенов и преципитирующих антител.
В основе механизма диффузионной преципитации в геле лежит следующее явление: если при кольцепреципитации, воспроизводимой в жидкой среде, образуется только одно кольцо преципитации независимо от числа вступивших в реакцию пар антиген – антитело, то в геле, где входящие в состав изучаемого экстракта антигены диффундируют навстречу соответствующим антителам с различной скоростью, точки эквивалентных соотношений между различными антигенами и соответствующими антителами располагаются в различных участках геля, где и образуются линии преципитации. Каждая из этих линий, следовательно, соответствует только одному комплексу антиген – антитело. Таким образом, сложные антигенные системы с помощью этого метода разлагаются на составные части как цвета спектра.
Основные закономерности реакции диффузной преципитации в геле заключаются в следующем:

• 
  один антиген дает только одну полосу преципитации;
  
• 
  если в растворе присутствует не один, а несколько антигенов, они ведут себя независимо друг от друга;
  
• 
  количество образующихся зон преципитации соответствует минимуму присутствующих в системе комплексов антиген – антитело;
  
• 
  путь, пройденный антигеном в геле во время реакции, пропорционален квадратному корню времени диффузии.