Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Работа 9. Выделение казеиногена из молока и гидролиз 
его, определение продуктов гидролиза 
Казеиноген обладает кислыми свойствами и в молоке находится в виде 
ани-онов, 
растворимых 
в 
воде 
(кальциевая 
соль 
казеиногена). 
Изоэлектрическая точка казеиногена находится при pH 4,7. Этим объясняется, 
что при подкислении молока до 4,7 молоко свертывается в результате 
выпадения в осадок казеиногена­. Не следует добавлять в молоко избыток 
кислоты, так как моле-кулы казеиногена­ вновь перезаряжаются и переходят в 
раствор, что мешает осаждению. 
Реактивы и оборудование: 
Серная кислота (10 %); концентрированная уксусная кислота; гидроксид 
натрия (10 %); сульфат меди (1 %); карбонат натрия (0,1 %); фенолфтале-ин 
(0,5 % спиртовой раствор); концентрированная азотная кислота; моло-ко; 
молибденовый­ реактив: 7,5 г молибдата аммония растворяют в 100 мл 
дистиллированной­ воды и добавляют 100 мл 32 % раствора азотной 
кислоты (плотность­ 1,21 г / мл). Воронки, фильтры, пробирки, стеклянные 
палочки, пи-петки на 2 мл, колбочки с обратным холодильником. 
Ход работы: 
К
 
4 мл молока приливают равный объем дистиллированной
 
воды. Осаждают казеиноген добавлением 2 капель концентрированной уксус­ 
ной кислоты. Выпавший осадок казеиногена отфильтровывают и промывают 
на фильтре дистиллированной водой два раза. 
Все содержимое с фильтра переносят в колбу (или пробирку), осадок с 
фильтра смывают в ту же колбу 2 мл 0,1 % раствора карбоната натрия и 
добавляют­ 4 мл 10 % раствора гидроксида натрия. Колбу закрывают 
39 

---

пробкой с обратным
­
холодильником и кипятят на умеренном огне 
15 
минут с 
момента закипания
.
После охлаждения к гидролизату добавляют равный 
объем 
0,1 %
раствора карбоната натрия и проводят реакции на продукты ги
-
дролиза
.
Белок открывают биуретовой реакцией 
(
см
.
работу 
1).
Фосфат об
-
наруживают молибденовой про
­
бой
.
К 
10
каплям гидролизата добавляют 
1
каплю фенолфталеина и 
1
каплю концентрированной азотной кислоты и по
-
сле обесцвечивания реакционной смеси
­
добавляют 
20
капель молибденового 
реактива
.
Затем доводят содержимое пробирки до кипения и сразу охлажда
-
ют ее в струе холодной воды
.
На дне про
­
бирки появляется желтый осадок 
фосфорномолибденовокислого
­
аммония
.