Учебно-методический комплекс ферганский филиал узбекского государственного университета физической культуры и спорта

Опыт. Определение содержания молочной кислоты в крови.
Ход работы:
Приготовьте 4 центрифужные пробирки, содержащие по 1,9 мл раствора трихлоруксусной кислоты с фторидом натрия. В пробирку № 1 поместите 0,1 мл крови, взятой из пальца в состоянии покоя; в пробирку № 2 поместите пробу крови (0,1 мл), взятую после выполнения испытуемым физической нагрузки (например, одноминутного интенсивного бега с высоким подниманием колен); в пробирку № 3 поместите 0,1 мл крови, взятой после 5 минут отдыха; в пробирку № 4 поместите 0,1 мл стандартного раствора молочной кислоты. Тщательно перемешайте содержимое всех пробирок. Через 15 минут центрифугируйте со скоростью 3000 об/мин. в течение 10 минут. Осторжно, чтобы не взмутить осадка белков в пробирках с кровью, отсосите по 0,5 мл прозрачной надосадочной жидкости из каждой пробирки и перенесите в широкие пробирки из тугоплавкого стекла. Добавьте в каждую пробирку по 1 капле раствора сернокислой меди и поместите в баню со льдом. Не вынимая из ледяной бани, осторожно, по каплям прилейте в каждую пробирку по 3 мл концентрированной серной кислоты. После этого поместите все пробирки на 5 минут (точно) в кипящую водяную баню для окисления молочной кислоты в уксусный альдегид. По истечении этого времени охладите содержимое пробирок до комнатной температуры и добавьте по две капли раствора параоксидифенила для окрашивания раствора (параоксидифенил не должен попадать на стенки прбирок). После тщательного перемешивания пробирки поместите на 10 минут в водяную баню с температурой 30^оС и далее на 1,5 минуты в кипящую водяную баню. При правильно проведенной работе содержимое пробирок окрашивается в фиолетовый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию молочной кислоты в исходной пробе. Не позже чем через 15 минут после кипячения колориметрируйте пробы на фотоэлектроколориметре при длине волны 540-560 нм (с зеленым светофильтром) в кювете с толщиной слоя исследуемой жидкости 0,3 см, используя в качестве контроля концентрированную серную кислоту. Расчет проводится по формуле:

где Х – концентрация молочной кислоты в крови в мг%, 100 – содержание молочной кислоты в стандартном растворе, Е_оп – экстинкция (коэффициент светового поглощения) в пробе крови, Е_ст – экстинкция стандартного раствора.

6. 
   Преподаватель проверяет записи и выводы студента по проведенным лабораторным опытам и даёт задание на дом – 10 мин.
   
7. 
   Студенты убирают и приводят в порядок рабочий стол – 5 мин.
   

5.