Учебно-методический комплекс ферганский филиал узбекского государственного университета физической культуры и спорта

Оборудование: спиртовка, пипетки, пробирки.
Реактивы: Уксусная кислота, 2%-раствор хлористого натрия, концентрированная азотная кислота, сульфасалициловая кислота, раствор, имитирующий мочу с содержанием белка.
Опыт – 1. Определение белка в моче.
Ход работы:

1. 
   Проба кипячением.
   

В пробирку наливают 2-3 мл профильтрированной мочи. Мочу подкисляют уксусной кислотой. Добавляют 1 мл раствора хлористого натрия и нагревают верхнюю часть пробирки до кипения. Затем добавляют 2-3 капли раствора уксусной кислоты.
Появление осадка, не растворяющегося при добавлении кислоты, указывает на присутствие в исследуемой моче белка.
Осадок фосфорнокислых или углекислых солей щелочно-земельных металлов, в отличие от белка, растворим в уксусной кислоте.

2. 
   Осаждение белка концентрированной азотной кис-лотой.
   

В пробирку наливают 1-2 мл концентрированной азотной кислоты и затем осторожно наслаивают равный объём про-фильтрованной исследуемой мочи. При наличии белка на границе раздела жидкостей появляется мутный белый слой в виде кольца. Проба с азотной кислотой более чувствительна, чем проба кипячением, и открывает до 0,0033% белка.

2. 
   Осаждение белка сульфосалициловой кислотой.
   

Самая чувствительная реакция на белок, положительная в разведении белка 1 : 50 000.
В пробирку наливают 2-3 мл исследуемой мочи и добавляют 5-6 капель раствора сульфосалициловой кислоты. Появление осадка или мути указывает на присутствие белка. Эта проба открывает белок при содержании его в моче до 0,0015%.

Опыт – 2. Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова-Брандберга.
Метод основан на реакции белка с концентрированной азотной кислотой.
Экспериментально установлено, что растворы, содержащие 0,0033% белка, дают мутное белое кольцо в конце 2-ой в начале 3-ей минуты после наслоения. Для этого проводится последова-тельное разведение мочи. Умножая разведение на 0,0033%, получают процентное содержание белка в моче.
Ход работы:
В пять пробирок наливают по 2 мл дистиллированной воды. В первую пробирку приливают 2 мл исследуемой мочи хорошо перемешивают и из нее 2 мл смеси переносят во вторую пробирку и т.д. до пятой пробирки. Из пятой пробирки 2 мл смеси выливают. Таким образом, получается разведение мочи в 2; 4; 8; 16; 32 раза.
С содержимым каждой пробирки проделывают реакцию с азотной кислотой. Для этого в 5 чистых пробирок наливают по 1 мл концентрированной азотной кислоты. Затем очень осторожно по стенке пробирок добавляют разведенные мочи по 1 мл. Отмечают разведение мочи в той пробирке, где реакция появления белкового кольца имела место между второй и третьей минутами. Это соответствует наличию 0,0033% белка. Умножая эту цифру на разведение мочи, получают содержание белка в моче в процентах.
Нормальная моча практически не содержит белка. В действительности в ней имеются следы белка, которые не открываются обычными реакциями, применяемыми в лабораториях.

6. 
   Преподаватель проверяет записи и выводы студента по проведенным лабораторным опытам и даёт домашнее задание – 10 мин.
   
7. 
   Студенты убирают и приводят в порядок рабочий стол – 5 мин.
   

5.