LPO o’nimleri.
LPO protsessinde h’a’r kıylı o’nimler payda boladı, olardı sha’rtli tu’rde eki tipke bo’ledi:
1.Erkin radikallı o’nimler: - L•, LO•, LO2•.
2. Molekulyar o’nimler 3 klassqa bo’linedi:
- birlemshi (dienli konyugatlar, trienli konyugatlar, dienketonlar h’a’m t.b.);
- ekilemshi yamasa aralıq (karbonil birikpeler- aldegidler, ketonlar), sonın’ ishinde malionlı dialdegid;
- juwmaqlawshı (shiffovlı tiykar, alkanlar);
LPO protsessinin’ intensivligin onın’ o’nimlerinin’ jıynalıp qalıwına, LPO aralıq o’nimlerinin’ – malonlı dialdegid (MDA) da’rejesine qarap bah’alawga boladı, MDA 2- tiobarbituratlı kislota (TBK) reaktsiyasında λ=535 nm. Maksimum jutılıwı menen boyalg’an trimetin kompleksin payda etedi.
U’skeneler h’a’m ximiyalıq reaktiler:
3000 ob/min iye laboratoriyalıq tsentofuga , suw banyası, fotokolorimetr, kyuıeta 1 sm., biologiyalıq material – alaman tıshqannın’ miyi Tris, TXU, N2O2, EDTA, HCI, TBK
Jumıstın’ barısı:
1. 840mg alaman tıshqannın’ miyin 30 ml Tris HCL (pH 7,4) suıyqlıqta gomogenizatsiya qıladı.
2. 10 ml gomogeniatqa 10 ml bufer qosıladı. Payda bolgan gmogenetatan 1,9 ml alıp og’an 2 ml 30% TXU qosıladı. Awısıp qalg’an gomogenttı h’a’r qaysısı 5ml den 3 bo’limge bo’ledi ( tab. 7)
3. 5 ml gomogentaqa 5 ml bufer, 1 ml N2O2 h’a’m onı termostatqa 370S da 30 minutqa jaylastıradı.
4. 5ml gomogentaqa 4 ml bufer, 1 ml EDTA qosıladı h’a’m termostatqa sol rejimde jaylastıradı.
6. İnkubatsiya tawsılg’annan son’ barlıq variantlardan probirkag’a 1,9 ml gomogenatlardı alınadı h’a’m 2 ml 30% TXU,02 ml 5 M HCL h’a’m 2 ml 0,75% TBK qosıladı. Kontrol probirkag’a sonday aq 0,2 ml 5M HCL h’a’m 2 ml 0,75 % TBK qosıladı.
7. Barlıq probirkalar 15 minutqa qaynap turg’an banyag’a jaylastırıladı , son’ınan tsentrifugatta suwıtıladı.
8. Opticheskuyu plotnost izmeryayut na fotokolorimetre pri 535 nm. Molyarnıy koeffitsient ekstintsii
Optikalıq tıg’ızlıq 535 nm. tolkın uzınlıg’ında fotokolorimetrde o’lshenedi. Ekstintsiyanın’ molekulyar koeffitsenti (ε) = 5,5*105 M-1 sm-1 g’a ten’.
Tablitsa 7
1 probirka (kontrol)
|
2 probirka
|
3 probirka
|
4 probirka
|
1,9 ml gomogenat
|
5 ml gomogenat
|
5 ml gomogenat
|
5 ml gomogenat
|
2 ml 30% TXU
|
-
|
-
|
-
|
-
|
5 ml Tris-NSl bufer
|
4 ml Tris-NSl bufer
|
4 ml Tris-NSl bufer
|
-
|
-
|
1 ml N2O2
|
1 ml EDTA
|
İnkubatsiya 370S, 30 min
|
İnkubatsiya 370S, 30 min
|
İnkubatsiya 370S, 30 min
|
İnkubatsiya 370S, 30 min
|
1,9 ml inkubatsiyalıq aralaspa alınadı.
|
-
|
2 ml 30 % TXU
|
2 ml 30 % TXU
|
2 ml 30 % TXU
|
0,2 ml 5 M HCI
|
0,2 ml 5 M HCI
|
0,2 ml 5 M HCI
|
0,2 ml 5 M HCI
|
2 ml 0,75 % TBK
|
2 ml 0,75 % TBK
|
2 ml 0,75 % TBK
|
2 ml 0,75 % TBK
|
İnkubatsiya 1000S, 15 min
|
Jumıstı h’u’jjetlestiriw:
Probalardın’ optikalıq tıgızlıg’ın o’lshew, Bugera-Lamberta-Bera nızamına say malon dialdegidinin’ (MDA) kontsentartsiyasın esaplaw:
D = ε • C • l,
C- MDA molyar kontsentratsiyası;
Kyuvetanın’ qalın’lıg’ı (1 sm)
Ε - MDA (εMDA= 5,5•105 M-1sm-1) ekstintsiyasının’ molyar koeffitsenti/
Do'stlaringiz bilan baham: |