Tahlilni xromatografik usullari, tasnifi va sifat tahlilda qo`llanishi

Ion xromatografiyasi - ion almashinadigan xromatografiyaning varianti, bunda konduktometrik detektor analitlarni (ionlarni) aniqlash uchun ishlatiladi. Detektordan o'tadigan mobil fazaning o'tkazuvchanligidagi o'zgarishlarni juda sezgir aniqlash uchun mobil fazaning fon o'tkazuvchanligi past bo'lishi kerak.
Ion xromatografiyasining ikkita asosiy varianti mavjud.
Ulardan birinchisi, ikki ustunli ion xromatografiyasi, ikkinchi ion almashinadigan ustun yoki analitik ustun va detektor o'rtasida joylashgan maxsus membranani bostirish tizimi yordamida harakatlanuvchi fazali elektrolitning elektr o'tkazuvchanligini bostirishga asoslangan. Tizimdan o'tayotganda mobil fazaning elektr o'tkazuvchanligi pasayadi.
Ion xromatografiyasining ikkinchi varianti bir ustunli ionli xromatografiyadir. Ushbu variant juda past elektr o'tkazuvchanligi bo'lgan mobil fazadan foydalanadi. Elektrolitlar sifatida zaif organik kislotalar keng qo'llaniladi: benzoik, salitsil yoki izoftalik.

Hajmini istisno qilish Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi

Hajmi chiqarib tashlash xromatografiyasi (gel xromatografiyasi) molekulalarni o'lchamlari bo'yicha ajratishga asoslangan yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasining maxsus versiyasidir. Molekulalarning statsionar va harakatlanuvchi fazalar oʻrtasida taqsimlanishi molekulalarning oʻlchamiga, qisman ularning shakli va qutbligiga bogʻliq.
Molekulalarning g'ovakli statsionar faza bilan o'zaro ta'sirining ikkita cheklovchi turi mumkin. Maksimal g'ovak diametridan kattaroq molekulalar umuman ushlanmaydi va birinchi navbatda elutsiya qilinadi, mobil faza bilan birga harakatlanadi. Sorbentning minimal g'ovak diametridan kichikroq bo'lgan molekulalar g'ovaklarga erkin kirib boradi va kolonnadan eng oxirgi bo'lib chiqariladi. Oraliq o'lchamlarga ega bo'lgan qolgan molekulalar qisman g'ovaklarda saqlanadi va elyusiya paytida o'z o'lchamlari va qisman shakliga ko'ra fraksiyalarga bo'linadi, hajmiga va qisman sorbentning teshiklariga kiradi. , ularning shakliga qarab. Natijada, moddalar turli xil saqlash vaqtlari bilan elutsiya qilinadi.

Ionlarni chiqarib tashlash xromatografiyasi

Ionni chiqarib tashlash xromatografiyasining mexanizmi ta'sirga asoslanadi, buning natijasida ionlangan shakldagi birikmalar ion almashinadigan sorbentda ushlanib qolmaydi, molekulyar shakldagi birikmalar esa g'ovak ichidagi statsionar va suvli fazalar o'rtasida taqsimlanadi. ion almashinadigan sorbent va sorbent zarralari orasidagi bo'shliqda harakatlanuvchi faza. Ajratish elektrostatik repulsiyaga, erigan birikmalar va sorbent o'rtasidagi qutbli va hidrofobik o'zaro ta'sirga asoslangan.
Sorbent yuzasida joylashgan anion guruhlar statsionar va harakatlanuvchi fazalar orasidagi yarim o‘tkazuvchan “membrana” vazifasini bajaradi. Salbiy zaryadlangan komponentlar statsionar mobil fazaga etib bormaydi, chunki ular xuddi shunday zaryadlangan funktsional guruhlar tomonidan qaytariladi va ustunning "o'lik" (erkin) hajmida elutsiya qilinadi. Molekulyar shakldagi komponentlar kation almashinadigan sorbent tomonidan "rad etilmaydi" va statsionar va harakatlanuvchi fazalar o'rtasida taqsimlanadi. Aralashmaning ion bo'lmagan komponentlarini ushlab turish darajasidagi farq ion bo'lmagan komponentlarning kation almashinadigan sorbentning funktsional guruhlari bilan qutbli o'zaro ta'siri va noion bo'lmagan komponentlarning gidrofobik o'zaro ta'siri bilan bog'liq. -polyar sorbent matritsasi.

Xiral xromatografiya

Xiral xromatografiyaning maqsadi optik izomerlarni ajratishdir. Ajratish chiral statsionar fazalarda yoki an'anaviy axiral statsionar fazalarda chiral mobil fazalar yordamida amalga oshiriladi. Xiral statsionar fazalar sifatida sirti o'zgartirilgan sorbentlar, guruhlar yoki chiral markazlarga ega bo'lgan moddalar (xitozanlar, siklodekstrinlar, polisakkaridlar, oqsillar va boshqalar (xiral selektorlar)) ishlatiladi. Bu holda, xuddi shu fazalar mobil fazalar sifatida ishlatilishi mumkin. normal fazali yoki teskari fazali xromatografiya.Enantiomerlarning ajralishini ta'minlash uchun axiral statsionar fazalardan foydalanilganda, mobil fazalarga xiral modifikatorlar qo'shiladi: chiral metall komplekslari, neytral xiral ligandlar, chiral ion-juft reagentlar va boshqalar.

Ultra samarali suyuqlik xromatografiyasi

Ultra samarali suyuqlik xromatografiyasi suyuq xromatografiyaning klassik yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasiga qaraganda samaraliroq variantidir.
Ultra samarali suyuqlik xromatografiyasining o'ziga xos xususiyati zarracha hajmi 1,5 dan 2 mkm gacha bo'lgan sorbentlardan foydalanishdir. Xromatografik ustunlar odatda uzunligi 50 dan 150 mm gacha va diametri 1 dan 4 mm gacha. AOK qilingan namunaning hajmi 1 dan 50 µl gacha bo'lishi mumkin. Bunday xromatografik ustunlardan foydalanish tahlil vaqtini sezilarli darajada qisqartirishi va xromatografik ajratish samaradorligini oshirishi mumkin. Biroq, bu holda, ustundagi bosim 80-120 MPa ga yetishi mumkin, kerakli detektor ma'lumotlarini yig'ish chastotasi 40-100 Gts gacha oshishi mumkin va xromatografik tizimning ustundan tashqari hajmi minimallashtirilishi kerak. Ultra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida ishlatiladigan xromatografiya uskunalari va ustunlari ushbu turdagi xromatografiya talablariga javob berish uchun maxsus moslashtirilgan.
Ultra samarali suyuqlik xromatografiyasi uchun mo'ljallangan uskunalar klassik yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida ham qo'llanilishi mumkin.
Kirish
Xromatografik tahlil moddaning bir jinsliligi mezoni hisoblanadi: agar tahlil qilinayotgan modda hech qanday xromatografik usul bilan ajratilmasa, u bir jinsli (qoralarsiz) hisoblanadi.
Xromatografik usullarning boshqalardan asosiy farqi fizik va kimyoviy usullar tahlil - o'xshash xususiyatlarga ega bo'lgan moddalarni ajratish imkoniyati. Ajratilgandan so'ng, tahlil qilinadigan aralashmaning tarkibiy qismlari har qanday kimyoviy, fizik va fizik-kimyoviy usullar bilan aniqlanishi (tabiatini belgilash) va miqdoriy (massa, konsentratsiya) bo'lishi mumkin.
Xromatografiya laboratoriyalarda va sanoatda ko'p komponentli tizimlarni sifat va miqdoriy tahlil qilish, ishlab chiqarishni nazorat qilish, ayniqsa ko'plab jarayonlarni avtomatlashtirish bilan bog'liq holda, shuningdek, alohida moddalarni (masalan, qimmatbaho) preparativ (shu jumladan sanoat) izolyatsiya qilish uchun keng qo'llaniladi. metallar), nodir va tarqoq elementlarni ajratish.
Eluentning agregatsiya holatiga ko'ra gaz (GC, GC) va suyuq xromatografiya (HPLC, HPLC) farqlanadi.
Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC, HPLC) sintetik polimerlar, dorilar, yuvish vositalari, oqsillar, gormonlar va boshqa biologik muhim birikmalarni tahlil qilish, ajratish va tozalash uchun ishlatiladi. Yuqori sezgir detektorlardan foydalanish juda oz miqdordagi moddalar (10 -11 -10 -9 g) bilan ishlashga imkon beradi, bu biologik tadqiqotlarda juda muhimdir.
HPLC usuli turli xil suyuq xromatograflarda amalga oshiriladi. Zamonaviy suyuq xromatograflar moddalarning murakkab aralashmalarini alohida komponentlarga ajratish va ajratilayotgan aralashmaning tarkibiy qismlarini sifat va miqdoriy tahlil qilish uchun mo'ljallangan.
yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi propifenazon
Rossiyada farmatsevtika ishlab chiqarish amaliyotiga GMP joriy etilishi munosabati bilan. ishlab chiqarish korxonalarida ham, dori vositalari sifatini davlat nazorati tizimida ham zamonaviy yagona tahlil usullaridan foydalanishning ahamiyati ortib bormoqda. Farmatsevtika sanoati rivojlangan mamlakatlarda (AQSh, Angliya, Yaponiya, Yevropa Ittifoqi mamlakatlari) moddalar va tayyor dorivor mahsulotlar sifatini tahlil qilishning asosiy usuli yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC) hisoblanadi. Bu usul xususiyatlariga ko'ra, dori vositalarining taxminan 80-90% miqdoriy tahlil talablariga javob beradi.
Har qanday xromatografik aniqlashni amalga oshirish texnikasiga ba'zi umumiy talablar qo'yiladi. Avvalo, yangi boshlanuvchilar orasida eng ko'p savollar tug'diradiganlarini ta'kidlash kerak.
1. Konditsioner. Suyuq xromatograf o'rnatilgan xonada haroratning keskin o'zgarishi bo'lmasligi kerak.
Haroratning o'zgarishi ushlab turish, samaradorlik va hatto ajratish selektivligining o'zgarishiga olib kelishi mumkin.
Yozgi issiqda, shartsiz xonalarda, oddiy fazali engil qaynaydigan mobil fazalar bilan ishlash juda qiyin. Kun davomida ular asta-sekin bug'lanadi, bu esa eluent tarkibining o'zgarishiga olib keladi.
Pastroq haroratlarda suvda boyitilgan va/yoki spirtli ichimliklarni o'z ichiga olgan elimentlar bilan ishlashda muammolar paydo bo'ladi. Bunday eluentlarning viskozitesi haroratning pasayishi bilan keskin ortadi, bu tizimdagi bosimning oshishiga olib keladi.
Haroratning kichik tebranishlarini ajratishga ta'sirini xromatografik ustunni yoki butun suyuqlik tizimini (barcha xromatograflar uchun mumkin emas) termostatizatsiya qilish orqali yo'q qilish mumkin.
2. Quvvat sifati. Ko'pgina zamonaviy xromatograflar quvvatni barqarorlashtirish tizimlari bilan jihozlangan, ammo joylarda elektr ta'minoti sifati ham yuqori bo'lishi kerak. Elektr ta'minoti etarlicha yaxshi bo'lmasa, avtomatik rejimda bir qator ta'riflarning har qanday ishlashi nosozlik tufayli muvaffaqiyatsiz bo'lishi mumkin.
3. Erituvchi moddalarning tozaligi. Mobil fazalarni tayyorlash uchun yuqori darajada toza erituvchilardan foydalanish kerak.
Umuman olganda, mobil fazaning tozaligiga qo'yiladigan talablar aniqlash usuliga, elyusiya usuliga (izokratik yoki gradient), detektorning maqsadli tahlil qiluvchiga sezgirligiga va uning konsentratsiyasiga bog'liq.
UVni aniqlashdan foydalanganda erituvchilarning tozaligiga bo'lgan talablar 230-240 nm dan kam bo'lgan qisqa to'lqin uzunligi diapazoniga o'tish bilan ortadi. 220-240 nm dan ortiq to'lqin uzunliklarida ultrabinafsha nurlanishini aniqlaydigan izokratik elutsiya uchun "yuqori tozalik" darajasidagi erituvchilardan foydalanish mumkin. va distillangan suv. Mobil fazaga qo'shilgan barcha reagentlar ham etarlicha toza bo'lishi kerak; foydalanishdan oldin kristall reagentlarni qayta kristallash foydalidir.
Gradientli elyusiya uchun "suyuq xromatografiya uchun" sifatli erituvchilar va bidistillatli suv kerak bo'ladi. Gradientli elyusiya usulida (teskari fazali xromatografiyada) maxsus talablar suvli tampon va ayniqsa suvning tozaligiga qo'yiladi. Buning sababi, birinchi navbatda, elutsiyaning dastlabki bosqichida adsorbent suvli bufer bilan boyitilgan mobil fazadan ifloslantiruvchi komponentlarni o'ziga singdiradi, ular keyinchalik elutsiya qilinadi va xromatogrammada "dumlar" shaklida paydo bo'ladi. "bo'sag'alar" va individual cho'qqilar, bu foydali analit signallarini chiqarishni sezilarli darajada murakkablashtiradi. .
Eng sof erituvchilar gradient elyusiya rejimida moddalarning iz miqdorini partiyaviy aniqlash uchun talab qilinadi.
Gradientli elyusiya rejimida aniqlashni, shuningdek, izokratik rejimda aniqlikni aniqlashni amalga oshirish uchun mobil fazani bir marta ishlatish kerak, ya'ni elyuatni tashlab yuborish yoki utilizatsiya qilish kerak.
Izokratik elyusiya bilan, agar sezgirlik bilan bog'liq maxsus muammolar bo'lmasa, sarflangan eluent qayta ishlatilishi mumkin. Eluat detektordan o'tib, mobil fazali idishga qaytariladigan tizim "qayta ishlash tizimi" deb ataladi. Bunday tizim, ayniqsa, taxminan 1 ml / min oqim tezligida standart ustunlar (250x4,6, 150x4,6) bo'yicha ko'p miqdordagi muntazam izokratik aniqlashlar bo'lsa foydalidir. Bunday hollarda qayta ishlash tizimi kuniga 200-300 ml gacha organik erituvchini tejaydi. Ushbu iqtisodiy tizim tahlil qilish uchun juda toza, qimmat erituvchilardan foydalanishga imkon beradi. Qimmatbaho erituvchilarni tejash masalasi mikrokolonkalardan (80x2, 100x2) foydalanishda unchalik dolzarb emas, chunki ajratish mobil fazaning kichikroq hajmini buyurtma qilishni talab qiladi.
4. Erituvchi moddalarni gazsizlantirish. Ko'chma fazalarni tayyorlash uchun xromatografiyada ishlatiladigan erituvchilar odatda erigan havoni o'z ichiga oladi. Ayniqsa, ko'p havoda suv mavjud.
Gazsizlanmaydigan elyuentlar ustida ishlaganda havo pufakchalari suyuqlik tizimining turli qismlariga kiradi: nasos, ustun, kapillyarlar, detektor. Havo suyuqlik tizimiga kirganda, xromatogrammada suyuqlik tizimidagi bosimning o'zgarishi natijasida yuzaga keladigan yuqori davriy shovqinlar paydo bo'ladi. Bu tahlilning sezgirligining keskin pasayishiga olib keladi.
Eluentdan havoni olib tashlash uchun u gazsizlanadi. Qoida tariqasida, faqat teskari fazalarni ajratish uchun eluentlar gazsizlanadi - chunki suvli-organik aralashmalar sezilarli miqdorda erigan havoni o'z ichiga oladi. Gradientli elyusiya holatida, shuningdek, florimetrik aniqlashdan foydalanganda ayniqsa ehtiyotkorlik bilan degassatsiya qilish kerak.
Teskari fazali rejimda gradientli elyusiya jarayonida ikkita elyuent aralashtiriladi - har xil tarkibdagi suv-organik aralashmalar. Gazsizlantirilmagan elyuentlarni aralashtirish erigan havoning intensiv chiqishiga olib keladi, bu umuman aniqlash uchun juda muhim (havo pufakchalari xromatogrammada nol chiziqda keskin "chiqindilar" sifatida qayd etilgan).
Ko'chma fazada erigan havoning yuqori miqdori bilan florimetrik aniqlashning sezgirligi pasayadi (flüoresans so'ndiriladi). Shunday qilib, florimetrik aniqlashni qo'llashda, eluentni gazdan chiqarishga alohida e'tibor berilishi kerak.
Suyuqlik xromatografiyasi uchun mobil fazalarni gazsizlantirishning uchta asosiy usuli mavjud.
lekin. Vakuumli degassatsiya - eliment Claisen kolbasida suv reaktiv nasosli vakuum ostida bir necha daqiqa ushlab turiladi. Degassatsiya jarayonida elimentning qaynashiga yo'l qo'ymaslik kerak.
b. Termal degazatsiya suvning yuqori nisbati bo'lgan suvli-organik elimentlarni gazsizlantirish uchun ishlatiladi. Ko'chma faza germetik yopilmagan kolbaga joylashtiriladi va taxminan 50 ° C haroratda suv hammomida qoldiriladi. 10-15 daqiqadan so'ng kolba tiqin bilan yopiladi va oqar suv ostida xona haroratiga qadar sovutiladi.
ichida. Ultratovush yordamida degazatsiya. Mobil faza bir necha daqiqa davomida soniklanadi va keyin 10-15 daqiqa davomida joylashishiga ruxsat beriladi. Bu usul ko'pincha suv-organik elyuentlarni gazsizlantirish uchun etarli darajada samarali emas.
Suyuq xromatografiya uchun zamonaviy nasos tizimlari avtomatik gazsizlantirish tizimlari bilan jihozlangan. Biroq, gradient tahlillarini amalga oshirayotganda, yuqoridagi usullardan biriga ko'ra, ikkala mobil fazani ham oldindan va "qo'lda" gazsizlantirish yaxshiroqdir.
5. Mobil fazani filtrlash. Nasosning muammosiz ishlashini ta'minlash uchun membranali filtr yordamida mobil fazani vakuum ostida filtrlash maqsadga muvofiqdir.
6. Suyuq tizimning ustuni va tarkibiy qismlarini yuvish. Tuzlar va kislotalarni o'z ichiga olgan suvli organik mobil fazalar bilan ishlagandan so'ng, butun suyuqlik tizimini (shu jumladan ustunni) 5-10% organik erituvchi qo'shilgan holda distillangan suv bilan yuvish kerak. Bunday yuvish ishlamaydigan vaqtlarda xromatografning suyuqlik tizimining tarkibiy qismlari va statsionar fazaning o'zi qo'shimcha ravishda eskirmasligi uchun amalga oshiriladi.
Bunday yuvishni amalga oshirmaslik, birinchi navbatda, nasos to'xtatilgandan so'ng, uning qismlari va detektor kyuvetasi devorlariga elimentdan tuzlar to'planishiga olib keladi. Bu, o'z navbatida, butun qurilmaning beqaror ishlashiga, shuningdek, nasosning harakatlanuvchi qismlarining muddatidan oldin eskirishiga olib keladi. Tuz va kislota o'z ichiga olgan elimentlar tizimini muntazam ravishda yuvmaslik statsionar fazaning ishlash muddatini qisqartirishga olib kelishi mumkin.
Suyuqlik tizimining biologik ifloslanishini oldini olish uchun yuvish suviga ba'zi organik erituvchi qo'shilishi kerak.
7. Oldingi bilan aralashmaydigan yangi mobil bosqichga o'tish. Bunday o'tish ikkala mobil faza bilan cheksiz aralashadigan oraliq erituvchi orqali amalga oshiriladi - odatda izopropanol yoki aseton orqali.
Suvli elimentdan nopolyar elyuentga o'tish uchun suyuq tizimni organik erituvchi qo'shilgan suv bilan yuvish kerak, keyin xromatografik ustunni olib tashlash kerak, tizimni izopropanol (aseton) bilan yuvish kerak, tizimni polar bo'lmagan elim bilan yuviladi va yangi ustun o'rnatilishi kerak.
Teskari o'tish uchun xromatografik ustun chiqariladi, suyuqlik tizimi izopropanol (aseton), keyin suvli elim bilan yuviladi va keyin yangi ustun o'rnatiladi.
Suvli moddadan qutbsiz elimentga o'tganda, nasos muhrining materiali qutbsiz erituvchilar uchun baholanganligiga ishonch hosil qiling.
8. Namunani filtrlash. Agar tahlil qilinayotgan namunada erimagan suspenziya bo'lsa, uni shpritsga ulangan membranali filtrdan o'tkazish orqali filtrlash maqsadga muvofiqdir. Afsuski, agar namuna kichik bo'lsa, bir millilitrdan kam bo'lsa, uni shu tarzda filtrlash deyarli imkonsiz bo'ladi.
To'xtatilgan qattiq moddalarni o'z ichiga olgan namunalarni muntazam tahlil qilish bilan ustundagi (frit) kirish filtri tiqilib qolishi mumkin, bu birinchi navbatda tizimdagi bosimning oshishiga olib keladi. Bunday holda, kirish filtrini almashtirish yaxshiroqdir va agar almashtirish bo'lmasa, uni 10-15 daqiqa davomida ultratovush bilan organik erituvchida yuving.
Muammoning eng maqbul echimi ustundan oldin in-line filtrini qo'llashdir. In-line filtri almashtiriladigan fritni o'z ichiga oladi - xuddi ustundagi kabi. Fritni in-line filtriga almashtirish odatiy operatsiya bo'lib, uni tez-tez bajarish mumkin.
9. Qo'riqlash ustunlarini qo'llash. "Nopok" namunalarni muntazam tahlil qilish bilan xromatografik ustun tezda ifloslanadi va ajratish qobiliyatini yo'qotadi. Bu holda namunani sinchkovlik bilan tayyorlashga taniqli muqobil asosiy ustunni ifloslanishdan himoya qiluvchi himoya ustunidan foydalanish hisoblanadi.
Ba'zan namuna tayyorlashni umuman o'tkazmaslik, balki asosiy ustundan oldin qator ichidagi filtr va oldingi ustunni qo'yish maqsadga muvofiqdir. Ushbu sxemaning afzalliklari kamroq mehnat va reagentlar bilan tahlillarning soddaligi va tezkorligidir.
10. Xromatografik ustunlarni saqlash. Etarlicha uzoq vaqt saqlashdan oldin, xromatografik ustunlar yuviladi va har bir statsionar faza uchun juda xos bo'lgan hal qiluvchi bilan to'ldiriladi.
Shunday qilib, normal fazali tizimlarda ishlash uchun xromatografik ustunlar odatda yuqori qaynaydigan uglevodorodlar, masalan, izooktan bilan to'ldiriladi. Teskari fazalar suv bilan yuviladi va asetonitril bilan to'ldiriladi, yoki izopropanol bilan past ovqatlanish tezligida. Suvli tamponlar bilan ishlash uchun mo'ljallangan fazalar oz miqdorda natriy azid (bakteriostatik) qo'shilishi bilan suv bilan to'ldiriladi.
Ustunni saqlash bo'yicha ko'rsatmalar uning pasportida ko'rsatilishi mumkin.
11. Suv buferlarini saqlash. Muntazam aniqlashlar bo'lsa, bir vaqtning o'zida mobil fazani tayyorlash uchun katta hajmdagi suvli buferni tayyorlash juda qulay bo'lishi mumkin. Afsuski, agar unga bakteriostatik natriy azid qo'shilmasa, suvli buferni bir necha kundan ortiq saqlash mumkin emas. Fosfat tamponiga asoslangan mobil fazalar juda yomon saqlanadi.
Ba'zida "tahlilning takrorlanishini oshirish" uchun katta hajmdagi suvli bufer tayyorlanadi. Umuman olganda, ushbu yondashuv bilan tahlilning takrorlanishi oshmaydi, ammo buferni saqlash bilan bog'liq muammolar muqarrar ko'rinadi.
Umuman olganda, savolga javob shundaki, suv buferini bir hafta yoki bir kunga tayyorlash kerakmi? - faqat qulaylik printsipi bilan belgilanadi.
12. Kalibrlashning muntazamligi. Qoidaga ko'ra, standart kalibrlash har kuni yoki har safar yangi elyuent tayyorlanganda amalga oshiriladi.
Kalibrlash xromatografik tizimning statsionar holatiga erishilganda amalga oshiriladi; o'qilishi mumkin bo'lgan parametrlar standart cho'qqining ushlab turish vaqti, uning maydoni (spektrofotometrik aniqlashda - mos yozuvlar to'lqin uzunligida), spektral nisbatlar (skanerlash yoki diod-matritsali spektrofotometrik detektordan foydalanganda).
Ishning boshida standartni ikki marta tahlil qilish mumkin - saqlash vaqtining takrorlanishini tasdiqlash uchun.
1. "BICILLIN-3" preparatining tarkibiy qismlarini HPLC yordamida aniqlash
Bicillin-3 uzoq muddatli penitsillin bo'lib, benzilpenitsillinning (BP) natriy, novokain va benzatin tuzlari aralashmasidir. Amaldagi VFS 42-3034-98 ga binoan preparatdagi BP ni aniqlash HPLC yordamida amalga oshiriladi, novokain spektrofotometrik tarzda aniqlanadi va benzatin (N,N1-dibenziletilendiamin) natriy xlorid bilan to'yingan suvli eritmadan efir bilan chiqariladi. . Efir bug'langandan keyin benzatin perklorik kislota bilan titrlash yo'li bilan aniqlanadi.
Evropa farmakopeyasida BP ning benzatin tuzidagi BP va benzatin miqdori metanol aralashmasida pH 3,5 da natriy fosfat eritmasi bilan gradient HPLC yordamida aniqlanadi.
Ushbu ishning maqsadi bisillin-3 tarkibidagi komponentlarni aniqlash uchun izokratik rejimda HPLC usulini ishlab chiqishdir.