MAVZU:8.FLOURESENT IMMUN TAHLIL REJA 1 IMMUNOFLORESAN USULI 2 FLOURESENT IMMUN TAHLILNING QO’LLANILISHI Immunofloresan usuli (RIF, immunofloressensiya reaktsiyasi, Koons reaktsiyasi) - ftorxrom bilan konjugatsiyalangan antikorlar yordamida o'ziga xos antijenlarni aniqlash usuli. U yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslikka ega.
U yuqumli kasalliklarning ekspress diagnostikasi (sinov materialida patogenni aniqlash), shuningdek, antikorlar va sirt retseptorlari va leykotsitlar markerlarini (immunofenotiplash) va boshqa hujayralarni aniqlash uchun ishlatiladi.
Diagnostika amaliyotida lyuminestsent antikorlar (zardob) yordamida yuqumli materiallarda, hayvonlar to'qimalarida va hujayra madaniyatida bakterial va virusli antigenlarni aniqlash keng qo'llaniladi. Floresan zardobini tayyorlash ma'lum ftoroxromlarning (masalan, flüoresan izotiosiyanat) immunologik o'ziga xosligini buzmasdan qon zardobi oqsillari bilan kimyoviy bog'lanish qobiliyatiga asoslanadi.
Usulning uch turi mavjud: to'g'ridan-to'g'ri, bilvosita, to'ldiruvchi. To'g'ridan-to'g'ri RIF usuli ftorxromlar bilan etiketlangan antikorlar bilan immun zardoblari bilan davolash qilingan to'qimalar antijenlari yoki mikroblar floresan mikroskopning UV nurlarida porlash qobiliyatiga asoslangan. Bunday lyuminestsent sarum bilan ishlov berilgan smeardagi bakteriyalar hujayra atrofi bo'ylab yashil chegara shaklida porlaydi.
Bilvosita RIF usuli ftorxrom bilan belgilangan antiglobulin (antikor) sarum yordamida antigen-antikor kompleksini aniqlashdan iborat. Buning uchun mikroblarning suspenziyasidan olingan smearlar antimikrobiyal quyon diagnostik sarumning antikorlari bilan davolanadi. So‘ngra mikrob antigenlari bilan bog‘lanmagan antitelalar yuvilib, mikroblarda qolgan antitelalar smearni ftoroxromlar bilan yorliqlangan antiglobulin (quyonga qarshi) zardobi bilan davolash orqali aniqlanadi. Natijada, floroxrom bilan belgilangan murakkab mikrob + antimikrobiyal quyon antikorlari + quyonlarga qarshi antitelalar hosil bo'ladi. Bu kompleks to'g'ridan-to'g'ri usulda bo'lgani kabi floresan mikroskopda kuzatiladi.
Mexanizm. Shisha slaydda sinov materialidan smear tayyorlanadi, olovga o'rnatiladi va patogen antigenlarga qarshi antikorlarni o'z ichiga olgan immun quyon zardobi bilan ishlanadi. Antigen-antikor kompleksini hosil qilish uchun preparat nam kameraga joylashtiriladi va 37 ° C da 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi, so'ngra antijen bilan bog'lanmagan antikorlarni olib tashlash uchun izotonik natriy xlorid eritmasi bilan yaxshilab yuviladi. Keyin preparatga quyon globulinlariga qarshi floresan antiglobulin zardobi qo'llaniladi, 37 ° C da 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi, so'ngra preparat izotonik natriy xlorid eritmasi bilan yaxshilab yuviladi. Floresan antiglobulin zardobining antigenga mahkamlangan o'ziga xos antikorlar bilan bog'lanishi natijasida nurli antigen-antikor komplekslari hosil bo'ladi, ular floresan mikroskopda aniqlanadi.
Floresant immun tahlil.
Immun tahlilning asosiy vazifalaridan biri an'anaviy heterojen usullar bilan ( ajratish operatsiyalari bilan) ijobiy taqqoslanadigan oddiy bir hil (ajralishsiz) usullarni ishlab chiqishdir . Ikkinchisi erkin antijenlarni bog'langan antikorlardan ajratish operatsiyasini o'z ichiga oladi, bu operatsiya tahlil davomiyligini oshiradi va xatolar manbai bo'lishi mumkin. Yangi immunoassay usullarining yana bir maqsadi tizimning muvozanatini tezlashtirishdir , bu tahlil qilish uchun zarur bo'lgan vaqtni qisqartiradi .
Immunologiyaning jadal rivojlanishi bu, Bazel immunologiya institutida to'plangan eksperimental tajriba taqdimotini o'z ichiga olgan " Immunologik usullar " seriyasining uchinchi kitobida aks ettirilgan . U ikkitadan immunologiyada rekombinant DNKdan foydalanishga oid besh bobni o'z ichiga oladiboblarda oqsillarni ajratish uchun yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasidan foydalanish tasvirlangan Alohida boblar quyidagi masalalarni ko'rib chiqadi: limfotsitlarning membrana antijenlarini aniqlash uchun monoklonal antikorlardan foydalanish , gistologik moslashuv antijenlarini tiplash , ikki o'lchovli elektroforez yordamida oqsillarni tahlil qilishning yangi usullari , B-hujayralarning o'sishini qo'llab-quvvatlovchi limfokinlar. To'rt bob klonlangan B- va T-hujayra liniyalari va gibridomalarni yaratish va boshqarishni tavsiflaydi va yana to'rtta revmatoid omil ishlab chiqaruvchi hujayralarni aniqlashning yangi usullarini muhokama qiladi . Ikki bob umumiy immunologik usullarga bag'ishlangan, masalan, floresan hujayralarni saralash va suyultirish tahlilini cheklash va nihoyat, oxirgi to'rt bobda maxsus immunologik savollarni o'rganish uchun hayvonlarning
ayrim turlari (qushlar, qo'ylar va amfibiyalar) bilan ishlashda qo'llaniladigan murakkab usullar ko'rib chiqiladi. Xuddi shu hujayralar yordamida madaniyatni bitta hujayra klonlash yoki tahlil qilish bilan boshlash mumkincheklovchi seyreltme usuli bilan . Ba'zi hollarda B-hujayra prekursorlarining populyatsiyasi B-220, AA4.1 yoki GF1.2 antijenlariga monoklonal antikorlar yordamida ijobiy tanlov yordamida sof shaklda boyitiladi yoki hatto izolyatsiya qilinadi. Bunday holda, stakanlarga adsorbsiyalash usullari ( penning ), rozet hosil qilish yoki lyuminestsent hujayra saralash usullari qo'llaniladi . Yagona hujayralar mikromanipulyatsiya orqali mikromassivlarning dumaloq tubi quduqlariga joylashtirilishi va 200 µl WEHI-K yoki tozalangan IL-3 ishtirokida yetishtirilishi mumkin. Bunday holda, muhit har 3 srda o'zgartiriladi va ijobiy kulturalar Limbro panellari quduqlarida va to'qima kulturalarida ko'paytiriladi.
Sitometriyadagi eng qiyin muammolardan biri o'ziga xos bo'lmagan binoni bilan bog'liq .
Adabiyotlar ro‘yxati: 1, Daniel J. Pennington. (2014). Sitokinlar va kimokinlar: hujayra signalizatsiyasi va yallig'lanish kasalliklari chorrahasida . Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molekulyar hujayra tadqiqotlari . 1843 , 2563-2582; 2Janeway CA Jr., Travers P., Walport M., Shlomchik MJ Immunobiologiya: salomatlik va kasallikdagi immunitet tizimi (5-nashr) . NY: Garland Science, 2001; 3M. Gudel. (2015). Gematopoetik ildiz hujayralari bo'yicha sharhlar seriyasiga kirish . Qon .
