|
Adabiyot:
, Daniel J. Pennington. (2014). Sitokinlar va kimokinlar: hujayra signalizatsiyasi va yallig'lanish kasalliklari chorrahasida . Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molekulyar hujayra tadqiqotlari . 1843 , 2563-2582;
Janeway CA Jr., Travers P., Walport M., Shlomchik MJ Immunobiologiya: salomatlik va kasallikdagi immunitet tizimi (5-nashr) . NY: Garland Science, 2001;
M. Gudel. (2015). Gematopoetik ildiz hujayralari bo'yicha sharhlar seriyasiga kirish . Qon . 125 , Reagentsiz, idish-tovoqsiz ferment immunoassay va uning ahamiyati.
Immun Tahlil (qisqartirilgan IET , ingliz fermenti bilan bog'liq immunosorbent tahlili , tahlil ) - bu o'ziga xos antigen-antikor reaktsiyasiga asoslangan turli xil birikmalar, makromolekulalar, viruslar va boshqalarni sifat yoki miqdoriy aniqlash uchun laboratoriya immunologik usuli. Shakllangan kompleksni aniqlash signalni ro'yxatga olish uchun yorliq sifatida ferment yordamida amalga oshiriladi.
Immun tahlilning mohiyati va tasnifi
O'rganish ob'ektlarining xilma-xilligi - past molekulyar og'irlikdagi birikmalardan tortib viruslar va bakteriyalargacha va Elishayni o'tkazish uchun sharoitlarning xilma-xilligi tufayli ushbu usulning ko'plab variantlari mavjud.
Tahlilning birinchi bosqichida (analitning bog'lanishi sodir bo'ladi) immunokimyoviy o'zaro ta'sir turiga ko'ra tasniflash mumkin. Agar tizimda faqat tahlil qilingan birikma va unga mos keladigan bog'lanish markazlari (antigen va o'ziga xos antikorlar) mavjud bo'lsa, u holda usul raqobatdosh emas . Agar birinchi bosqichda tizimvaqtning o'zida tahlil qilinadigan birikmani va uning analogini (ferment bilan belgilangan analit yoki qattiq fazada immolizatsiya qilingan tahliliy modda) o'z ichiga olsa, cheklangan miqdordagi maxsus bog'lanish joylari uchun raqobatlashsa, u holda usul raqobatbardosh hisoblanadi .
bo'lmagan tahlil formatiga misol "sendvich " usulidir . Tahlil qilingan antigenni o'z ichiga olgan eritma immobilizatsiyalangan antikorlar bilan tashuvchiga qo'shiladi. Birinchi bosqichda inkubatsiya jarayonida qattiq fazada antigen-antikor kompleksi hosil bo'ladi. Keyin tashuvchisi bog'lanmagan komponentlardan yuviladi va ferment bilan belgilangan maxsus antikorlar qo'shiladi. Ikkilamchi inkubatsiyadan va antikor-ferment konjugatining ortiqcha miqdorini olib tashlaganidan so'ng , tashuvchining fermentativ faolligi aniqlanadi, bu test antijenining dastlabki kontsentratsiyasiga mutanosibdir . Muayyan immunokompleksni aniqlash bosqichida antijen, xuddi immobilizatsiyalangan va etiketli antikorlar molekulalari orasiga o'ralgan bo'lib , bu "sendvich" usuli nomining keng qo'llanilishiga sabab bo'ldi. Fermentativ reaksiya (rangli reaksiya) vodorod peroksid va rangsiz birikma bilan ifodalangan substrat ishtirokida sodir boʻladi, u peroksidaza reaktsiyasi jarayonida tadqiqotning yakuniy bosqichida rangli reaksiya mahsulotiga oksidlanadi. Bo'yashning intensivligi aniqlangan o'ziga xos antikorlar miqdoriga bog'liq. Natija spektrofotometrik yoki vizual tarzda baholanadi .
"Sendvich " - usuli faqat kamida ikkita antijenik determinant yuzasida mavjud bo'lgan antijenlarni tahlil qilish uchun ishlatilishi mumkin . Turli infektsiyalar uchun immunoassay fermenti uchun ko'plab test tizimlari ushbu formatga asoslanadi: OIV infektsiyasi, virusli gepatit, sitomegalovirus , herpes , toksoplazma va boshqa infektsiyalar.
Qattiq fazali tahlilning raqobatbardosh sxemalari orasida ikkita asosiy format mavjud:
To'g'ridan-to'g'ri raqobatbardosh tahlil formati qattiq fazada immobilizatsiyalangan o'ziga xos antikorlardan foydalanadi va ferment bilan belgilangan va etiketlanmagan antigen immobilizatsiyalangan antikor bilan bog'lanish uchun raqobatlashadi.
Immobilizatsiyalangan antikorlarga analit va belgilangan antigenning belgilangan konsentratsiyasini o'z ichiga olgan eritma qo'shiladi, inkubatsiya qilinadi va tashuvchini bog'lanmagan komponentlardan yuvgandan so'ng, qattiq fazada hosil bo'lgan o'ziga xos immun komplekslarning fermentativ faolligi qayd etiladi. Aniqlangan signalning kattaligi antigen konsentratsiyasiga teskari bog'liqdir.
To'g'ridan-to'g'ri sxemaning afzalligi - kam sonli bosqichlar, bu tahlilni avtomatlashtirishni osonlashtiradi. Sxemaning kamchiliklari orasida ferment konjugatlarini sintez qilish usullarining murakkabligi , shuningdek namuna komponentlarining ferment faolligiga mumkin bo'lgan ta'siri kiradi.
Bilvosita raqobatbardostahlil formatida ferment bilan belgilangan antikorlar (o'ziga xos yoki ikkilamchi) va qattiq fazada immobilizatsiyalangan antigen-oqsil tashuvchi
konjugat qo'llaniladi. Belgilangan turlarga qarshi antikorlardan foydalangan holda bilvosita sxema Elishayning eng keng tarqalgan sxemalaridan biridir. Tashuvchi yuzasida antigen-oqsil konjugati immobilizatsiya qilinadi , unga aniqlanishi kerak bo'lgan antijeni va belgilangan konsentratsiyasi belgilanmagan o'ziga xos antikorlarni o'z ichiga olgan eritma qo'shiladi, inkubatsiya qilinadi va bog'lanmagan komponentlar olib tashlangandan so'ng belgilangan konsentratsiyali etiketli turlarga qarshi antikorlar qo'shiladi. Inkubatsiya va tashuvchini yuvishdan so'ng, qattiq fazada hosil bo'lgan o'ziga xos immun komplekslarning fermentativ faolligi aniqlanadi va signal qiymati aniqlanayotgan antigen konsentratsiyasiga
teskari proportsionaldir . Umumjahon reagentdan foydalanish - anti- turga qarshi antikorlar - turli antijenlarga antikorlarni aniqlash imkonini beradi. Bundan tashqari, tahlil qilingan namuna va etiketli reagent tizimga turli bosqichlarda kiritiladi, bu esa namunadagi turli effektorlarning ferment yorlig'ining katalitik xususiyatlariga ta'sirini yo'q qiladi. Biroq, bunday tahlil sxemasi qo'shimcha bosqichlarni joriy etish tufayli uni amalga oshirishni murakkablashtiradi.
Do'stlaringiz bilan baham: |
