Аминокислот в белках, пептидах и лекарственных препаратах

разделения такие же, как указано в методе 1.
Для образования флуоресцирующих производных с ОФА вторичные амины 
(иминокислоты, такие как пролин) предварительно окисляют натрия гипохлоритом 
или хлорамином Т. В методике используются сильнокислотные катионообменные 
колонки для разделения свободных аминокислот с последующим постколоночным 
окислением натрия гипохлоритом или хлорамином Т и постколоночной 
дериватизацией с использованием ОФА и тиольных соединений, таких как N-
ацетил-L-цистеин или 2-меркаптоэтанол. Длительное воздействие натрия 
гипохлорита или хлорамина Т не оказывает заметного влияния на дериватизацию 
первичных аминокислот.
Разделение аминокислот на ионообменной колонке достигается подбором 
рН и ионной силы. После постколоночной дериватизации элюируемых 
аминокислот с ОФА продукты реакции проходят через флуориметрический 
детектор. Интенсивность флуоресценции ОФА-производных аминокислот 
измеряется при длине волны возбуждающего света 348 нм и длине волны 
излучаемого света 450 нм.
Предел обнаружения для большинства ОФА-производных аминокислот 
обычно составляет несколько десятков пикомоль. Линейность сигнала 
наблюдается в области от нескольких пикомоль до нескольких десятков 
наномоль. Для получения удовлетворительных данных рекомендуется перед 
гидролизом использовать образцы белка/пептида массой более 500 нг. 
МЕТОД 
3. 
ПРЕДКОЛОНОЧНАЯ 
ДЕРИВАТИЗАЦИЯ 
С 
ФЕНИЛИЗОТИОЦИАНАТОМ 
Фенилизотиоцианат (ФИТЦ) реагирует с аминокислотами с образованием 
фенилтиокарбамильных производных (ФТК-производных), которые могут быть 
обнаружены с высокой чувствительностью при длине волны 254 нм. 
Предколоночная дериватизация аминокислот с ФИТЦ проводится перед 
разделением смеси аминокислот методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с УФ-
спектрофотометрическим детектированием.
После удаления реактива под вакуумом сухие замороженные производные 
аминокислот могут храниться без заметной деструкции в течение нескольких 
недель. Раствор пробы для введения может храниться в холодном месте в 
течение 3 дней без заметных изменений хроматографического сигнала.