Аминокислот в белках, пептидах и лекарственных препаратах

Восстанавливающий раствор. 83,3 мкл пиридина, 16,7 мкл 4-
винилпиридина, 16,7 мкл трибутилфосфина и 83,3 мкл воды помещают в 
подходящий контейнер и перемешивают. 
Методика. Ампулу для гидролиза с образцом белка/пептида (от 1 мкг до 
100 мкг) помещают в большую ампулу. Переносят восстанавливающий раствор в 
большую ампулу, герметично запаивают в вакууме (около 50 мкм ртутного столба, 
или 6,7 Па) и нагревают при температуре около 100 °С в течение 5 мин. Затем 
внутреннюю ампулу для гидролиза помещают в вакуумный эксикатор и сушат в 
течение 15 мин для удаления остатков реактивов. Пиридилэтилированный 
образец затем гидролизуют согласно описанной ранее методике. Для оценки 
открываемости 
пиридилэтилцистеина 
параллельно 
проводят 
реакцию 
пиридилэтилирования стандартного образца белка, содержащего 1—8 остатков 
цистеина. Длительное время инкубации при реакции пиридилэтилирования может 
быть причиной модификации концевых α-аминогрупп и ε-аминогрупп лизина в 
белке. 
МЕТОД 8 
Восстановление и алкилирование цистеина/цистина происходит при 
пиридилэтилировании в жидкой фазе. 
Исходные растворы. Готовят и фильтруют 3 раствора: 1 М раствор трис-
гидрохлорида с рН 8,5, содержащий 0,004 М динатрия эдетата (исходный раствор 

---

А); 8 М раствор гуанидина гидрохлорида (исходный раствор В); 10 % раствор 2-
меркаптоэтанола (исходный раствор С). 
Восстанавливающий раствор. Для получения буферного раствора 6 М 
раствора гуанидина гидрохлорида в 0,25 М растворе трис-гидрохлорида 
смешивают 1 объем исходного раствора А и 3 объема исходного раствора В.
Методика. Около 10 мкг испытуемого образца растворяют в 50 мкл 
восстанавливающего раствора и прибавляют около 2,5 мкл исходного раствора С. 
Выдерживают при комнатной температуре в защищенном от света месте в 
атмосфере азота или аргона в течение 2 ч. Для проведения реакции 
пиридинэтилирования к раствору белка прибавляют около 2 мкл 4-винилпиридина 
и выдерживают дополнительно 2 ч при комнатной температуре в защищенном от 
света месте. Обессоливают белок/пептид методом обращенно-фазовой ВЭЖХ, 
собирая белковую/пептидную фракцию. Перед кислотным гидролизом собранный 
образец может быть высушен при помощи вакуумного центрифугирования. 
МЕТОД 9 
Восстановление и алкилирование цистеина/цистина происходит при 
карбоксиметилировании в жидкой фазе.