Аминокислот в белках, пептидах и лекарственных препаратах

Гидролизующий раствор. 2,5 М раствор меркаптоэтансульфоновой 
кислоты. 
Парофазный гидролиз. От 1 мкг до 100 мкг испытуемого белка/пептида 
сушат в ампуле для гидролиза. Ампулу помещают в большую ампулу, 
содержащую около 200 мкл гидролизующего раствора. Герметично запаивают 

---

большую ампулу в вакууме (около 50 мкм ртутного столба, или 6,7 Па). Нагревают 
ампулу для гидролиза до температуры от 170 °С до 185 °С в течение 12,5 мин. 
После гидролиза ампулу с образцом сушат в вакууме в течение 15 мин до 
удаления остатков кислоты. 
МЕТОД 3 
Использование 
тиогликолевой 
кислоты 
(ТГК) 
в 
качестве 
восстанавливающей кислоты предотвращает окисление триптофана при 
гидролизе. 
Гидролизующий раствор. 7 М хлороводородная кислота, содержащая 1 % 
фенола, 10 % трифторуксусной кислоты и 20 % тиогликолевой кислоты. 
Парофазный гидролиз. От 10 мкг до 50 мкг испытуемого белка/пептида 
высушивают в ампуле для гидролиза. Ампулу для гидролиза помещают в 
большую ампулу, содержащую около 200 мкл гидролизующего раствора. Большую 
ампулу герметично запаивают в вакууме (около 50 мкм ртутного столба, или 6,7 
Па). Нагревают ампулу для гидролиза до температуры 166 °С в течение 15—
30 
мин. После гидролиза для удаления остатков кислоты ампулу с образцом 
сушат в вакууме в течение 5 мин. Окрываемость триптофана в этом методе 
зависит от количества испытуемого образца. 
МЕТОД 4 
Перед гидролизом белка проводят окисление цистеина/цистина и 
метионина надмуравьиной кислотой. 
Окисляющий раствор. Смешивают 1 объем 30% раствора водорода 
пероксида и 9 объемов муравьиной кислоты безводной и выдерживают при 
комнатной температуре в течение 1 ч. Полученную надмуравьиную кислоту 
используют свежеприготовленной. 
Методика. Образец белка/пептида растворяют в 20 мкл муравьиной 
кислоты безводной, нагревают при температуре 50 °С в течение 5 мин и 
прибавляют 100 мкл окисляющего раствора. Процесс окисления проводят в 
течение 10—30 мин. В данной реакции цистеин превращается в цистеиновую 
кислоту, а метионин — в метионинсульфон. Избыток реактива удаляют из образца 
при помощи вакуумного центрифугирования. Окисленный белок может быть затем 
гидролизован по методу 1 или методу 2. При наличии галогенидов эта методика 
может приводить к модификации остатков тирозина. 
МЕТОД 5 
Окисление цистеина/цистина происходит во время жидкофазного гидролиза 
с натрия азидом.