Образцы известного белка. Этот метод расчета может быть использован
для установления аминокислотного состава и концентрации белка в образце
белка с известной молекулярной массой и аминокислотным составом с
использованием данных, полученных при аминокислотном анализе. При анализе
состава
известного
белка
учитывают,
что
некоторые
аминокислоты
высвобождаются хорошо, в то время как открываемость других аминокислот
может быть затруднена вследствие полного или частичного разрушения
(например, триптофан, цистеин, треонин, серин, метионин), неполного
расщепления связей (например, изолейцин и валин), контаминации свободными
аминокислотами (например, глицин и серин).
Для определения количественного содержания белка используют
аминокислоты, открываемость которых наилучшая. Хорошо открываемыми
аминокислотами обычно являются: аспартат-аспарагин, глутамат-глутамин,
аланин, лейцин, фенилаланин, лизин и аргинин. Этот перечень может изменяться
на основании наработанного опыта по проведению анализа. Для определения
количественного содержания белка по каждой хорошо открываемой аминокислоте
количество каждой хорошо открываемой аминокислоты, в наномоль, делят на
предполагаемое количество остатков этой аминокислоты в белке. Рассчитывают
среднее значение содержания белка. Значения содержания белка, установленные
по количеству каждой хорошо открываемой аминокислоты, должны быть
равномерно распределены относительно среднего значения. В тех случаях, когда
значения содержания белка, определенные по этим аминокислотам, имеют
неприемлемые отклонения (обычно более 5 %) от средней величины, их
отбрасывают. С учетом оставшихся значений пересчитывают среднее
содержание белка в испытуемом образце. Для определения аминокислотного
состава испытуемого образца содержание каждой аминокислоты делят на
рассчитанное среднее значение содержания белка. Относительную ошибку
определения аминокислотного состава рассчитывают в процентах по формуле:
s
m
m
100
,
где:
m — экспериментально установленное количество аминокислот в
наномоль на аминокислотный остаток;
m
s
— известное значение остатков для этой аминокислоты.
Средняя значение относительной ошибки определения аминокислотного
состава является средним значением абсолютных величин относительных
ошибок определения каждой аминокислоты, обычно кроме расчета данных по
триптофану и цистеину. Средняя величина относительной ошибки определения
аминокислотного состава может дать важную информацию об устойчивости
анализа во времени. Соответствие найденного аминокислотного состава образца
белка и известного состава может служить подтверждением подлинности и
чистоты белка в испытуемом образце.