П. И. Гунькова общая и пищевая микробиология часть I учебное пособие

3
. МЕТОДЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ 
МИКРООРГАНИЗМОВ
Цель работы
: получить представление о работе с чистыми 
культурами микроорганизмов; научиться готовить фиксированные 
окрашенные и прижизненные препараты микроорганизмов и препа-
раты-отпечатки. 
В практике микробиологии морфологию, биохимию и физио-
логию микроорганизмов изучают, используя чистые культуры мик-
роорганизмов. Чистой культурой называют популяцию микроорга-
низмов, являющихся потомством одной клетки. 
При работе с чистыми культурами следует соблюдать опреде-
ленные условия, которые позволили бы предохранить их от загрязне-
ния другими микроорганизмами. Все операции проводят в зоне го-
рящей спиртовки. Мелкие предметы (предметные стекла, пинцеты, 
ножницы, бактериологические петли и иглы) стерилизуют – фламби-
руют (от нем. 
flamme
– пламя) в пламени спиртовки. Микроорганиз-
мы, выращенные на плотной среде, извлекают из пробирки с помо-
щью бактериологической петли или иглы. Для взятия бульонной 
культуры используют стерильную пипетку или петлю. 
3
.1. Приготовление фиксированных окрашенных 
препаратов микроорганизмов 
Цель фиксации
: убить клетки микроорганизмов и зафиксировать 
их на поверхности предметного стекла, чтобы они не были смыты при 
окрашивании и промывке водой; улучшить окраску клеток, поскольку 
мертвые клетки становятся более проницаемыми для красителей. 
Порядок 
приготовления 
фиксированного 
окрашенного 
препарата при взятии культуры микроорганизмов, выращенных в 
пробирке на скошенном питательном агаре, следующий: 
1. Зажечь спиртовку. 
2. Взять чистое предметное стекло и профламбировать его, 
пронеся несколько раз сквозь пламя спиртовки. 
3. Охладить стекло на столе и нанести на него каплю воды из 
флакона. 

---

26
4. Взять пробирку с культурой в левую руку между большим 
и указательным пальцами и держать в наклонном положении так, 
чтобы было видно содержимое пробирки. 
5. Взять в правую руку бактериологическую петлю, накалить 
докрасна проволоку в пламени спиртовки и обжечь примыкающую 
к проволоке часть держателя. 
6. Мизинцем и безымянным пальцем правой руки прижать 
к ладони ватную пробку, вынуть ее из пробирки и держать в таком 
положении, не касаясь окружающих предметов.
В н и м а н и е ! Класть пробку на стол или другие поверхности 
нельзя во избежание ее контаминации микроорганизмами (от лат. 
contaminatio
– приведение в соприкосновение). 
7. Края открытой пробирки обжечь в пламени спиртовки. 
8. Ввести петлю в пробирку и, охладив ее о стенки пробирки, взять 
небольшое количество культуры с поверхности питательной среды. 
В н и м а н и е ! Питательный агар нельзя нарушать петлей. 
9. Снова обжечь края пробирки в пламени горелки и закрыть 
ее, пронося пробирку сквозь пламя и надевая ее на пробку. Пробирку 
с культурой поставить в штатив. 
10. Извлеченный из пробирки петлей материал внести в каплю 
воды на предметном стекле и после аккуратного перемешивания тон-
ким слоем равномерно распределить по поверхности стекла. 
11. Оставшиеся на петле клетки микроорганизмов тщательно 
сжечь в пламени горелки, после чего петлю поставить на место. 
12. Суспензию микроорганизмов высушить в потоке горячего 
воздуха над пламенем спиртовки и зафиксировать, пронося 3–4 раза 
над пламенем (нельзя фиксировать невысушенные мазки). 
13. После охлаждения стекло положить на мостик и окрасить 
метиленовым синим в течение 2 мин, следя по песочным часам. 
14. Краску смыть водой, препарат осушить фильтровальной 
бумагой, осторожно прикладывая ее к предметному стеклу. 
15. На окрашенный препарат нанести каплю кедрового масла. 
Предметное стекло положить на предметный столик, при помощи 
макровинта погрузить иммерсионный объектив (90х) в масло и найти 
микроскопическую картину, используя для установления четкости 
изображения микровинт. 
В н и м а н и е! Нельзя использовать микровинт для поиска 
изображения микробов в препарате. 

---

27