O’zbеkistоn rеspublikasiоliy va o’rta maхsus ta’lim vazirligi urganch davlat univеrsitеti tabiiy fanlar fakulteti

Yaqinlik xromatografiyasi. Bu usul oqsil izolyatsiyasi uchun juda xos va samarali hisoblanadi. Organik kimyoda qo'llaniladigan ko'plab an'anaviy izolyatsiyalash va tozalash usullari, masalan, sublimatsiya va turli erituvchilar bilan ekstraktsiya, molekulalari osongina yo'q bo'lib ketishi sababli ko'pchilik oqsillarga mos kelmaydi. Shuning uchun oqsillarni izolyatsiya qilish va tozalash uchun KG5 ... KG6 M konsentratsiyasida bir necha ming boshqa biomolekulalarni o'z ichiga olgan aralashmada mavjud bo'lgan oqsillardan istalgan birini ajratib olish mumkin bo'lgan maxsus usullar ishlab chiqilgan. Ushbu usullardan biri, yaqinlik. xromatografiya usuli (3.7-rasm), retseptorlari oqsillari, bir qator fermentlar va immunoglobulinlarni ajratish va tozalashda hal qiluvchi rol o'ynadi. Usul barchaga ma'lum bo'lgan haqiqatga asoslanadi, chunki oqsillar o'zlarining biologik funktsiyalarini bajarib, ligandlar deb ataladigan boshqa o'ziga xos turdagi molekulalar bilan teskari bog'lanadi. Natijada kuchli kovalent bo'lmagan oqsil-ligand komplekslari hosil bo'ladi.



Rasm. 3.7. Afinit xromatografiyasi orqali oqsillarni ajratib olishning sxematik diagrammasi.
Bu usulga ko'ra, ajratiladigan oqsil bilan maxsus bog'langan ligand diametri 10...50 mkm bo'lgan erimaydigan polimer granulalariga kovalent tarzda biriktiriladi. Ushbu oqsilni hujayra ekstraktidan ajratib olish uchun ikkinchisi polimer granulalari bilan to'ldirilgan ustunga ligand biriktirilgan holda kiritiladi, shundan so'ng ustun bufer eritmasi bilan bir necha marta yuviladi. Bunda kolonnada faqat polimerga fiksatsiyalangan ligandga yuqori yaqinlikka ega bo'lgan oqsillar saqlanib qoladi; qolganlari oddiygina tampon bilan yuviladi. Oqsilning ligandga yaqinligi va o‘ziga xosligi juda yuqori bo‘lgani uchun ko‘pincha bir vaqtning o‘zida yuzlab boshqa oqsillarni o‘z ichiga olgan hujayra ekstraktidan juda oz miqdordagi oqsilni ajratib olish va tozalash mumkin.
Xromatografik usullarni tasniflashning turli usullari mavjud.
1. Statsionar va harakatlanuvchi fazalarning fizik tabiati bo'yicha suyuq xromatografiya (LC) mavjud - agar harakatlanuvchi faza suyuq bo'lsa; gaz xromatografiyasi (GC) - agar mobil faza gazsimon bo'lsa.
Suyuq xromatografiya, o'z navbatida, statsionar fazaning agregatsiya holatiga qarab bo'linishi mumkin: qattiq-suyuq fazaga (TLC) - statsionar faza qattiq; suyuqlik-suyuq-fazali xromatografiya (LC) - statsionar faza suyuqlikdir. HPLC ko'pincha bo'linish xromatografiyasi deb ataladi.
Gaz xromatografiyasi, statsionar fazaning agregatsiya holatiga qarab, gaz adsorbsiyasi (GTC, GAC) va gaz-suyuqlik (GLC) yoki gaz taqsimotiga bo'linadi.
2. Sorbent qatlami boʻylab sorbatlarni harakatlantirish usuliga koʻra rivojlanuvchi (eluent), frontal, joy oʻzgartirish usullari va elektroxromatografiya boʻlinadi.
Rivojlanayotgan usuldan foydalanganda, o'rganilayotgan aralashmaning namunasi boshlang'ich nuqtada (ustunga kirish) bir qismga xromatografik qadoqlash (sorbent) qatlamiga AOK qilinadi. Mobil faza oqimining ta'siri ostida namuna zonasi ustun bo'ylab harakatlana boshlaydi va namunaning alohida tarkibiy qismlarining (Rv R2, R3) harakat tezligi ularning tegishli taqsimot konstantalari qiymatlariga teskari proportsionaldir. . Bunday holda, mobil faza statsionar faza tomonidan deyarli so'rilmasligi muhim ahamiyatga ega.
Qattiq adsorbentlardan xromatografik ajratish muhiti (suyuq-qattiq va gaz-qattiq tizimlar) sifatida foydalanilganda, siljish effektlari ham rivojlanish va frontal xromatografiya orqali ajratish jarayonlariga ma'lum hissa qo'shadi.
Analitik maqsadlarda xromatografiyaning eluent (rivojlanayotgan) usuli eng keng tarqalgan.