O’zbеkistоn rеspublikasiоliy va o’rta maхsus ta’lim vazirligi urganch davlat univеrsitеti tabiiy fanlar fakulteti

Amaliy mashg’ulot - 7
Mavzu: Gel-xromatografiya. Xromatogafiya nazorati: katlamli, fraksion, uzluksiz. Fraksiyani yig‘ish. Birikmalarni ajratishning spetsifik (o‘ziga xos) ko‘rsatish imkoniyatini beradigan usullar yordamida fraksiyalarni tahlil etish.
Gel o'tkazuvchanlik xromatografiyasi (gel filtrlash).
Gel o'tkazuvchanligi xromatografiyasi (ba'zan molekulyar elak xromatografiyasi deb ataladi) bo'linish xromatografiyasi usulidir, chunki u molekulalarning o'lchamlaridagi farqlar tufayli ularni ajratishga asoslangan. Bu usul oqsillarni ham shakli, ham hajmi bo'yicha ajratish imkonini beradi.

Rasm. 3.6. Gel filtrlash sxemasi:
Ajratish shishgan polimer gelning sferik granulalari bilan to'ldirilgan xromatografik ustunlarda (3.6-rasm) amalga oshiriladi (gel granulalarining o'lchamlari a bo'lishi mumkin - dekstrin granulalari bilan to'ldirilgan ustunga katta va kichik oqsillar aralashmasi qo'llaniladi; b - ular o'tganda. ustun ostida kichik oqsil molekulalari granulalarga kirib, saqlanib qoladi; c - 10 dan 500 mkm gacha bo'lgan kattaroq protein molekulalari ustunni birinchi bo'lib tark etadi). Gel granulalari ma'lum bir o'rtacha kattalik bilan tavsiflangan ichki kanallarga (g'ovaklarga) ega, ularning o'tkazuvchanligi bunga bog'liq. Proteinlar aralashmasi ustundan o'tganda, alohida oqsil molekulalarining o'lchamiga qarab fazoda ajratiladi. Gel granulalariga kira olmaydigan yirik oqsil molekulalari ustun bo'ylab yuqori tezlikda harakatlanadi. O'rta va kichik oqsil molekulalari hajmiga qarab jelning teshiklarida saqlanadi. Ustunning yuqori qismida eng kichik molekulalar jel zarrachalariga kirib borishning yuqori qobiliyati tufayli saqlanadi. Bufer eritmasi bilan elutsiya qilinganda, eng katta oqsil molekulalari birinchi bo'lib chiqadi.
Eluat alohida fraktsiyalarda yig'iladi. Muayyan oqsil fraktsiyasi ustunidan chiqish uchun ishlatiladigan elyuat hajmi qanchalik yuqori bo'lsa, bu fraktsiyadagi oqsilning molekulyar og'irligi shunchalik past bo'ladi.