Harakatlanuvchi va statsionar fazalarning turiga qarab normal fazali va teskari fazali xromatografiya farqlanadi

Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (yuqori bosimli suyuqlik xromatografiyasi) kolonnali xromatografiya usuli bo'lib, unda harakatlanuvchi faza statsionar faza (sorbent) bilan to'ldirilgan xromatografik ustun orqali harakatlanadigan suyuqlikdir. Yuqori samarali suyuqlik xromatografiya ustunlari yuqori kirish bosimining pasayishi bilan tavsiflanadi.
Moddalarning ajralish mexanizmiga ko'ra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasining quyidagi variantlari farqlanadi: asosiy namoyon bo'ladigan molekulalararo o'zaro ta'sirlarning tabiatiga ko'ra adsorbsion, taqsimot, ion almashinish, o'lcham-tashqari, xiral va boshqalar.

Tarqatishning yuqori samarali suyuq xromatografiyasida ajralish statsionar (qoida tariqasida, statsionar tashuvchining yuzasiga kimyoviy payvandlangan) va harakatlanuvchi faza o'rtasida ajratiladigan moddalarning tarqalish koeffitsientlaridagi farq tufayli sodir bo'ladi.

Harakatlanuvchi va statsionar fazalarning turiga qarab normal fazali va teskari fazali xromatografiya farqlanadi. Oddiy fazali yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida statsionar faza qutbli (ko'pincha silikagel yoki payvandlangan NH2- yoki CN-guruhlari va boshqalar bilan silikagel), mobil faza esa qutbsiz (geksan yoki aralash) bo'ladi. geksanning ko'proq qutbli organik erituvchilar - xloroform, spirtlar va hokazo.). Moddalarning saqlanishi ularning qutbliligi ortishi bilan ortadi. Oddiy fazali xromatografiyada mobil fazaning elutsiya qobiliyati uning qutbliligi ortishi bilan ortadi.
Teskari fazali xromatografiyada statsionar faza qutbsiz (payvandlangan C4, C8, C18 va boshqalar bilan gidrofobik silikagellar); mobil faza qutbli (suv va qutbli erituvchilarning aralashmalari: asetonitril, metanol, tetrahidrofuran va boshqalar). Moddalarning saqlanishi ularning hidrofobikligi (qutbsizligi) ortishi bilan ortadi. Organik erituvchining tarkibi qanchalik ko'p bo'lsa, mobil fazaning elutsiya qobiliyati shunchalik yuqori bo'ladi.
Ion almashinadigan xromatografiyada eritmada kation va anionlarga dissotsilangan aralashma moddalarining molekulalari sorbent (kation yoki anion) orqali harakatlanayotganda ionlar bilan aniqlanayotgan ionlarning o'zaro ta'sir kuchi turlicha bo'lganligi sababli ajratiladi. sorbent guruhlari.

Hajmni istisno qilishda (elak, gel o'tkazuvchanligi, gel filtratsiyasi) xromatografiyada moddalar molekulalari statsionar fazaning teshiklariga kirish qobiliyatiga qarab o'lchamlari bo'yicha ajratiladi. Bunday holda, statsionar fazaning eng kichik gözeneklariga kirishga qodir bo'lgan eng katta molekulalar ustundan birinchi bo'lib, kichik molekulyar o'lchamdagi moddalar esa oxirgi bo'lib chiqadi.

Xiral xromatografiya optik faol birikmalarni alohida enantiomerlarga ajratadi. Ajratish chiral statsionar fazalarda yoki axiral statsionar fazalarda chiral mobil fazalar yordamida amalga oshirilishi mumkin.

Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasining boshqa variantlari mavjud.

ko'pincha, ajratish mobil va statsionar fazalarning turiga, shuningdek, aniqlanayotgan birikmaning tabiatiga qarab bir emas, balki bir vaqtning o'zida bir nechta mexanizmlar orqali amalga oshiriladi.

Qo'llash sohasi
Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi dori vositalarining “Haqiqiylik”, “Nopokliklar”, “Eritish”, “Dozaning bir xilligi”, “Miqdori” testlarida ham sifat, ham miqdoriy tahlil qilish uchun muvaffaqiyatli qo‘llaniladi. Shuni ta'kidlash kerakki, xromatografiya bir namunada bir nechta testlarni birlashtirishga imkon beradi, jumladan, "Haqiqiylik" va "Miqdorni aniqlash".
Uskunalar
Tahlil qilish uchun tegishli asboblar - suyuq xromatograflar qo'llaniladi.

Suyuq xromatografning tarkibi odatda quyidagi asosiy komponentlarni o'z ichiga oladi:

- ko'chma fazaga ega bo'lgan idishni (yoki mobil fazaning bir qismi bo'lgan alohida erituvchilari bo'lgan idishlarni) va mobil fazani gazsizlantirish tizimini o'z ichiga olgan mobil faza tayyorlash qurilmasi;

- nasos tizimi;

- mobil fazali mikser (agar kerak bo'lsa);

- namunani kiritish tizimi (injektor), qo'lda yoki avtomatik bo'lishi mumkin (avtosampler);

- xromatografik ustun (termostatga o'rnatilishi mumkin);

- detektor (turli aniqlash usullari bilan bir yoki bir nechta);

- xromatografni boshqarish tizimi, ma'lumotlarni yig'ish va qayta ishlash.

Bundan tashqari, xromatograf quyidagilarni o'z ichiga olishi mumkin: namunani tayyorlash tizimi va ustundan oldingi reaktor, ustunni almashtirish tizimi, ustundan keyingi reaktor va boshqa jihozlar.

Nasos tizimi
Nasoslar mobil fazani ma'lum tezlikda ustunga etkazib beradi. Mobil faza tarkibi va oqim tezligi doimiy bo'lishi yoki tahlil paytida o'zgarishi mumkin. Mobil fazaning doimiy tarkibi bo'lsa, jarayon izokratik, ikkinchisida - gradient deb ataladi. Zamonaviy suyuq xromatograf nasos tizimi kompyuter tomonidan boshqariladigan bir yoki bir nechta nasoslardan iborat. Bu gradient elyusiyasi paytida ma'lum bir dasturga muvofiq mobil faza tarkibini o'zgartirish imkonini beradi.
Analitik yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi uchun nasoslar kolonna kirishidagi bosimda 40 MPa gacha bo'lgan bosimda 0,1 dan 10 ml / min gacha bo'lgan kolonnaga mobil fazaning oqim tezligini saqlashga imkon beradi. Bosim pulsatsiyalari nasos dizayniga kiritilgan maxsus damping tizimlari tomonidan minimallashtiriladi. Nasoslarning ishchi qismlari korroziyaga chidamli materiallardan tayyorlanadi, bu esa mobil fazada agressiv komponentlardan foydalanish imkonini beradi.
Mikserlar
Mikserda, agar kerakli aralashma oldindan tayyorlanmagan bo'lsa, nasoslar tomonidan etkazib beriladigan alohida erituvchilardan bitta mobil faza hosil bo'ladi. Mikserdagi mobil fazaning tarkibiy qismlarini aralashtirish past bosimda ham (nasoslardan oldin) va yuqori bosimda (nasoslardan keyin) sodir bo'lishi mumkin. Mikser mobil fazani tayyorlash va izokratik elutsiya uchun ishlatilishi mumkin.

Mikserning hajmi gradient elyusiyasida tarkibiy qismlarni ushlab turish vaqtiga ta'sir qilishi mumkin.

njektorlar
Injektorlar AOK qilingan namunaning hajmini o'zgartirish qobiliyatiga ega universal yoki faqat ma'lum hajmdagi namunani yuborish uchun diskret bo'lishi mumkin. Ikkala turdagi injektorlar avtomatik bo'lishi mumkin ("avtomatik injektorlar" yoki "avtomatik namunalar"). Namuna (eritma) injektori to'g'ridan-to'g'ri xromatografik ustunning oldida joylashgan. Injektorning dizayni mobil fazaning oqim yo'nalishini o'zgartirishga va namunani ma'lum hajmdagi dozalash halqasiga (odatda 10 dan 100 mkl gacha) yoki o'zgaruvchan hajmdagi maxsus dozalash moslamasiga oldindan yuborish imkonini beradi.
Loop o'lchami uning yorlig'ida ko'rsatilgan. Diskret injektor dizayni odatda pastadirni almashtirishga imkon beradi. Zamonaviy avtomatik injektorlar bir qator qo'shimcha funktsiyalarga ega bo'lishi mumkin, masalan, namuna tayyorlash stantsiyasining funktsiyasini bajaradi: namunalarni aralashtirish va suyultirish, ustundan oldingi derivatizatsiya reaktsiyasini amalga oshirish.
Xromatografik ustun
Xromatografik ustunlar odatda zanglamaydigan po'latdan, shisha yoki sorbent bilan to'ldirilgan va har ikki tomondan 2-5 mikron gözenek diametrli filtrlar bilan yopilgan plastik quvurlardir. Analitik ustunning uzunligi 5 dan 60 sm gacha yoki undan ko'p bo'lishi mumkin, ichki diametri esa 2 dan 10 mm gacha. Mikrokolonkali xromatografiyada ichki diametri 2 mm dan kam bo'lgan ustunlar qo'llaniladi. Shuningdek, ichki diametri taxminan 0,3-0,7 mm bo'lgan kapillyar ustunlar mavjud. Preparativ xromatografiya uchun ustunlar ichki diametri 50 mm va undan ortiq bo'lishi mumkin.
Analitik ustunning oldida turli xil yordamchi funktsiyalarni bajaradigan qisqa ustunlar (qo'riqchi ustunlar) o'rnatilishi mumkin, ularning asosiysi analitik ustunni himoya qilishdir. Odatda, tahlil xona haroratida amalga oshiriladi, ammo ajratish samaradorligini oshirish va tahlil qilish vaqtini qisqartirish uchun 80 - 100 ° S gacha bo'lgan haroratlarda ustunli termostatni qo'llash mumkin. Ajratish paytida yuqori haroratdan foydalanish imkoniyati statsionar fazaning barqarorligi bilan cheklangan, chunki uni yo'q qilish yuqori haroratlarda mumkin.
Statsionar faza (sorbent)
Odatda sorbentlar sifatida ishlatiladi:

silikagel, alumina, oddiy fazali xromatografiyada ishlatiladi. Bu holatda ushlab turish mexanizmi odatda adsorbsiyadir;

silika jeli, qatronlar yoki kislotali yoki asosiy guruhlar bilan payvandlangan polimerlar. Qo'llash sohasi - ion almashinuvi va ion xromatografiyasi;
silika jeli yoki ma'lum bir gözenek hajmi taqsimotiga ega polimerlar (o'lchamni istisno qilish xromatografiyasi);
kimyoviy modifikatsiyalangan sorbentlar (payvandlangan fazali sorbentlar), ko'pincha silikagel asosida tayyorlanadi. Saqlash mexanizmi mobil va statsionar fazalar orasidagi adsorbsiya yoki taqsimotdir.

Ko'lami payvand qilingan funktsional guruhlarning turiga bog'liq. Sorbentlarning ayrim turlaridan ham teskari, ham normal fazali xromatografiyada foydalanish mumkin;

kimyoviy modifikatsiyalangan chiral sorbentlar, masalan, tsellyuloza va amiloza hosilalari, oqsillar va peptidlar, siklodekstrinlar, enantiomerlarni ajratish uchun ishlatiladigan xitozanlar (xiral xromatografiya).
Payvandlangan sorbentlar turli darajadagi kimyoviy modifikatsiyaga ega bo'lishi mumkin. Eng ko'p ishlatiladigan payvand fazalari:

- oktadesil guruhlari [Si- (CH2) 17-CH3] (oktadesilsilan (ODS) yoki C18 sorbent);

- oktil guruhlari [Si- (CH2) 7-CH3] (oktilsilan yoki C8 sorbent);
- fenil guruhlari [Si- (CH2) n- (C6H5)] (fenilsilan sorbent);

- siyanopropil guruhlari [Si- (CH2) 3-CN] (CN sorbent);

- aminopropil guruhlari [Si- (CH2) 3-NH2] (NH2 sorbent);

- diol guruhlari [Si- (CH2) 3-OCH (OH) -CH2-OH] (sorbent diol).

Ko'pincha, tahlil C18 sorbent yordamida teskari fazali rejimda polar bo'lmagan payvandlangan fazalarda amalga oshiriladi.

Silikagel asosida olingan payvandlangan fazali sorbentlar, agar ishlab chiqaruvchi tomonidan boshqacha qoida nazarda tutilgan bo'lmasa, pH 2,0 dan 7,0 gacha bo'lgan qiymatlarda kimyoviy jihatdan barqarordir. Sorbent zarralari sharsimon yoki tartibsiz shaklga va turli g'ovaklikka ega bo'lishi mumkin. Analitik yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida sorbentning zarracha hajmi odatda 3-10 mkm, preparativ yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida - 50 mkm yoki undan ko'p. Bundan tashqari, monolit ustunlar mavjud, ularda sorbent butun ustun hajmini to'ldiradigan teshiklari bo'lgan monolitdir.
Yuqori ajralish samaradorligi sorbent zarralarining yuqori sirt maydoni (bu ularning mikroskopik o'lchamlari va gözeneklerin mavjudligi natijasidir), shuningdek sorbent tarkibining bir xilligi va uning zich va bir xil qadoqlanishi bilan ta'minlanadi.
Detektorlar
Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida turli aniqlash usullari qo'llaniladi. Umumiy holda, xromatografik ustundan so'ng, unda erigan komponentlar bilan harakatlanuvchi faza detektor xujayrasiga kiradi, bu erda uning u yoki bu xususiyatlari (spektrning ultrabinafsha yoki ko'rinadigan hududida yutilish, floresans, sinishi indeksi, elektr o'tkazuvchanligi) mavjud. va boshqalar) doimiy ravishda o'lchanadi. Olingan xromatogramma mobil fazaning ma'lum bir fizik yoki fizik-kimyoviy parametrining vaqtga bog'liqligi grafigi hisoblanadi.
Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida eng keng tarqalgan detektorlar spektrofotometrikdir. Maxsus mo'ljallangan mikrokyuvetada moddalarni elyusiya qilish jarayonida elyuatning optik zichligi oldindan tanlangan to'lqin uzunligida o'lchanadi. Detektorning chiziqliligining keng diapazoni bitta xromatogrammada aralashmalarni ham, aralashmaning asosiy tarkibiy qismlarini ham tahlil qilish imkonini beradi. Spektrofotometrik detektor o'zining ish diapazonidagi (odatda 190-600 nm) har qanday to'lqin uzunligida aniqlash imkonini beradi.
Bir vaqtning o'zida bir nechta to'lqin uzunliklarini aniqlashga imkon beruvchi ko'p to'lqinli detektorlar va diodli massivdagi detektorlar, bir vaqtning o'zida butun ish to'lqin uzunligi diapazonida (qoida tariqasida, 190-950 nm) optik zichlikni qayd etish imkonini beradi. Bu detektor hujayradan o'tuvchi komponentlarning yutilish spektrlarini qayd etish imkonini beradi.
Florometrik detektor lyuminestsent birikmalar yoki ularning floresan hosilalari shaklida lyuminestsent bo'lmagan birikmalarni aniqlash uchun ishlatiladi. Florometrik detektorning ishlash printsipi so'rilgan yorug'likning lyuminestsent nurlanishini o'lchashga asoslangan. Absorbsiya odatda spektrning ultrabinafsha mintaqasida amalga oshiriladi, floresan nurlanishning to'lqin uzunliklari so'rilgan nurning to'lqin uzunliklaridan oshadi. Florometrik detektorlar juda yuqori sezuvchanlik va selektivlikka ega.
Floresan detektorlarning sezgirligi spektrofotometrik sezgirlikdan taxminan 1000 baravar yuqori. Zamonaviy lyuminestsent detektorlar nafaqat xromatogrammalarni olish, balki tahlil qilinadigan birikmalarning qo'zg'alish va floresans spektrlarini qayd etish imkonini beradi.

Spektrning ultrabinafsha va ko'rinadigan hududlarida (masalan, uglevodlar) zaif so'rilgan birikmalarni aniqlash uchun refraktometrik detektorlar (refraktometrlar) qo'llaniladi.

Lazer nurlari tarqalishining bug'lanish detektorlarining ishlash printsipi harakatlanuvchi fazaga kiritilgan xromatografik erituvchilar va tahlil qilinadigan moddalarning bug' bosimidagi farqga asoslanadi.
Ustunning chiqishida mobil faza azot yoki CO2 bilan aralashtirilgan nebulizerga kiritiladi va nozik aerozol shaklida 30 - 160 ° S haroratli isitiladigan evaporatator trubasiga kiradi, bunda mobil faza sodir bo'ladi. bug'lanadi.
Uchuvchi bo'lmagan analit zarralarining aerozollari yorug'lik oqimini diffuziya kamerasiga tarqatadi. Yorug'lik oqimining tarqalish darajasiga qarab, aniqlangan birikma miqdorini aniqlash mumkin. Detektor refraktometrikga qaraganda sezgirroq, uning signali namunaning optik xususiyatlariga, aniqlangan moddalardagi funktsional guruhlarning turiga, mobil faza tarkibiga bog'liq emas va gradient elyusiya rejimida ishlatilishi mumkin. .
Elektrokimyoviy detektorlar (konduktometrik, amperometrik, kulometrik va boshqalar). Amperometrik detektor qattiq elektrod yuzasida oksidlanishi yoki kamayishi mumkin bo'lgan elektroaktiv birikmalarni aniqlash uchun ishlatiladi. Analitik signal - oksidlanish yoki qaytarilish oqimining kattaligi. Detektor xujayrasi kamida ikkita elektrodni o'z ichiga oladi - ishlaydigan va mos yozuvlar elektrod (kumush xlorid yoki po'lat). Elektrodlarga ish potentsiali qo'llaniladi, uning qiymati aniqlanayotgan birikmalarning tabiatiga bog'liq.
O'lchovlar doimiy potentsialda ham, impulsli rejimda ham, ish elektrodning potentsial o'zgarishi profili signalni ro'yxatga olishning bir tsikli davomida o'rnatilganda amalga oshirilishi mumkin. Amperometrik detektor uglerod materiallaridan (ko'pincha shishasimon uglerod yoki grafit) va metalldan: platina, oltin, mis, nikeldan tayyorlangan ishchi elektrodlardan foydalanadi.

Ion xromatografiyasida anion va kationlarni aniqlash uchun konduktometrik detektor ishlatiladi. Uning ishlash printsipi moddani elutsiya qilish jarayonida mobil fazaning elektr o'tkazuvchanligini o'lchashga asoslangan.

Yuqori sezuvchanlik va selektivlikka ega bo'lgan massa spektrometrik detektori juda informatsiondir. Suyuq xromatografiya uchun massa spektrometrlarining so'nggi modellari 20 dan 4000 amu gacha bo'lgan m / z massa oralig'ida ishlaydi.

Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida Furye-IR detektorlari, radioaktivlik va boshqalar ham qo'llaniladi.

Ma'lumotlarni yig'ish va qayta ishlash tizimi
Zamonaviy ma'lumotlarni qayta ishlash tizimi - xromatogrammani ro'yxatga olish va qayta ishlash, shuningdek, xromatografning ishlashini nazorat qilish va xromatografik tizimning asosiy parametrlarini kuzatish imkonini beruvchi o'rnatilgan dasturiy ta'minot bilan xromatografga ulangan shaxsiy kompyuter.
Mobil bosqich
Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida harakatlanuvchi faza ikki tomonlama funktsiyani bajaradi: u desorbsiyalangan molekulalarning ustun bo'ylab o'tkazilishini ta'minlaydi va muvozanat konstantalarini tartibga soladi va natijada statsionar faza (sirtda adsorbsiyalangan) va o'zaro ta'sir natijasida ushlab turadi. ajratiladigan moddalarning molekulalari bilan. Shunday qilib, yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida harakatchan faza tarkibini o'zgartirib, birikmalarning saqlanish vaqtlariga, ularni ajratishning selektivligiga va samaradorligiga ta'sir qilish mumkin.
Mobil faza bitta erituvchidan, ko'pincha ikkitadan, agar kerak bo'lsa, uchta yoki undan ko'pdan iborat bo'lishi mumkin. Mobil fazaning tarkibi unga kiritilgan erituvchilarning hajm nisbati sifatida ko'rsatilgan. Ba'zi hollarda, maxsus ko'rsatilishi kerak bo'lgan massa nisbati ko'rsatilishi mumkin. Mobil fazaning tarkibiy qismlari sifatida ma'lum bir pH qiymatiga ega bufer eritmalar, turli tuzlar, kislotalar va asoslar va boshqa modifikatorlardan foydalanish mumkin.
Oddiy fazali xromatografiya odatda suyuq uglevodorodlar (geksan, siklogeksan, geptan) va boshqa nisbatan qutb bo'lmagan erituvchilardan, mobil fazaning elutsiya kuchini boshqaradigan qutbli organik birikmalarning kichik qo'shimchalaridan foydalanadi.

Teskari fazali xromatografiyada harakatlanuvchi faza sifatida suv yoki suvli-organik aralashmalar qo'llaniladi. Organik qo'shimchalar odatda qutbli organik erituvchilardir (asetonitril va metanol).

Ajratishni optimallashtirish uchun ma'lum bir pH qiymatiga ega bo'lgan suvli eritmalar, xususan, bufer eritmasi, shuningdek mobil fazaga turli qo'shimchalar qo'llanilishi mumkin: kislotali birikmalarni ajratishda fosforik va sirka kislotalari; asosiy birikmalarni ajratishda ammiak va alifatik aminlar va boshqa modifikatorlar.
Xromatografik tahlilga ko'chma fazaning tozaligi katta ta'sir ko'rsatadi, shuning uchun suyuq xromatografiya uchun maxsus ishlab chiqarilgan erituvchilardan (shu jumladan, suv) foydalanish afzalroqdir.

UV spektrofotometrik detektordan foydalanganda, mobil faza aniqlash uchun tanlangan to'lqin uzunligida aniq yutilishga ega bo'lmasligi kerak. Muayyan ishlab chiqaruvchining erituvchisining ma'lum bir to'lqin uzunligidagi shaffoflik chegarasi yoki optik zichligi ko'pincha qadoqda ko'rsatilgan.

Mobil faza va tahlil qilingan eritmalar erimagan zarrachalar va gaz pufakchalarini o'z ichiga olmaydi. Laboratoriya sharoitida olingan suv, suvli eritmalar, suv bilan oldindan aralashtirilgan organik erituvchilar, shuningdek tahlil qilingan eritmalar nozik filtrlash va degasatsiyadan o'tkazilishi kerak. Ushbu maqsadlar uchun odatda ma'lum bir erituvchi yoki eritmaga nisbatan 0,45 mkm inert gözenek hajmi bo'lgan membranali filtr orqali vakuum ostida filtrlash qo'llaniladi.
Ko'rsatilishi kerak bo'lgan xromatografik shartlar ro'yxati
Farmakopeya monografiyasi quyidagilarni o'z ichiga olishi kerak: ishlab chiqaruvchi va katalog raqamini ko'rsatgan holda ustunning to'liq tijorat nomi, ustun o'lchamlari (uzunligi va ichki diametri), zarrachalar hajmini ko'rsatgan holda sorbent turi, g'ovak o'lchami, ustun harorati (agar termostatizatsiya zarur bo'lsa). ), AOK qilingan namunaning hajmi (hajm o'lchamlari), mobil fazaning tarkibi va uni tayyorlash usuli, mobil fazaning besleme tezligi, detektor turi va aniqlash shartlari (agar kerak bo'lsa, foydalanilgan detektorning parametrlari hujayra), gradient rejimining tavsifi (agar foydalanilsa),
shu jumladan dastlabki shartlarga qayta muvozanatlash bosqichi, xromatografiya vaqti, protsedura va hisoblash formulasining batafsil tavsifi, standart va sinov eritmalarini tayyorlash tavsiflari.

Agar avtonamuna oluvchida ustundan oldingi derivatizatsiya ishlatilsa, avtomatik namuna olish dasturi haqida ma'lumot beriladi. Ustunlardan keyingi derivatizatsiyadan foydalanilganda, derivatizatsiya qiluvchi reagentning oziqlanish tezligi, aralashtirish halqasining hajmi va uning harorati ko'rsatiladi.

Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasining o'zgartirilgan turlari
Ion juftlik xromatografiyasi
Teskari fazali yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasining turlaridan biri bu ion juftlik xromatografiyasi - bu ionlangan birikmalarni aniqlash imkonini beradi. Buning uchun mobil fazaning an'anaviy teskari fazali yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi tarkibiga ionli guruhlarga ega bo'lgan hidrofobik organik birikmalar (ion-juft reagentlar) qo'shiladi. Asoslarni ajratish uchun odatda natriy alkil sulfatlar, kislotalarni ajratish uchun tetraalkilammoniy tuzlari (tetrabutilammonium fosfat, setiltrimetilammonium bromid va boshqalar) ishlatiladi
Ion-juft rejimida noonik komponentlarni ajratishning selektivligi teskari fazali ushlab turish mexanizmi bilan cheklanadi va asoslar va kislotalarning saqlanishi sezilarli darajada oshadi, shu bilan birga xromatografik cho'qqilarning shakli yaxshilanadi.

Ion-juft rejimida tutilish bir-biri bilan raqobatlashadigan ancha murakkab muvozanat jarayonlari bilan bog'liq. Bir tomondan, gidrofobik o'zaro ta'sirlar va harakatlanuvchi fazaning qutbli muhitining siljishi ta'siri tufayli, gidrofob ionlarning alkil silikagel yuzasida sorbsiyasi zaryadlangan guruhlar mobil fazaga duch keladigan tarzda mumkin. .

Bunda sirt ion almashuv xossalariga ega bo`ladi, tutilish esa ion almashinadigan xromatografiya qonunlariga bo`ysunadi. Boshqa tomondan, to'g'ridan-to'g'ri eluent hajmida ion juftining hosil bo'lishi, so'ngra uning teskari fazali mexanizmga muvofiq sorbentga sorbsiyasi mumkin.
Hidrofil o'zaro ta'sir xromatografiyasi (HILIC xromatografiyasi)
Gidrofil o'zaro xromatografiya teskari fazali yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida zaif saqlanib qolgan qutbli birikmalarni ajratish uchun ishlatiladi. Xromatografiyaning ushbu variantida harakatlanuvchi faza sifatida tuzlar, kislotalar yoki asoslar qo'shilgan suv-asetonitril aralashmalari qo'llaniladi. Statsionar fazalar, qoida tariqasida, polar guruhlar (amino, diol, siyanopropil guruhlari va boshqalar) bilan o'zgartirilgan silika jellaridir. Qanchalik qutbli birikmalar qattiqroq tutiladi. Mobil fazaning elutsiya qobiliyati ortib borayotgan polarit bilan ortadi.
Ion almashinuvi va ionli yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi
Ion almashinuvi xromatografiyasi ham organik (geterotsiklik asoslar, aminokislotalar, oqsillar va boshqalar), ham noorganik (turli kationlar va anionlar) birikmalarini tahlil qilish uchun ishlatiladi. Tahlil qilinayotgan aralashmaning tarkibiy qismlarini ion almashinadigan xromatografiyada ajratish tahlil qilinayotgan moddalar ionlarining sorbentning ion almashinadigan guruhlari bilan teskari o'zaro ta'siriga asoslangan. Bu sorbentlar asosan polimerik ion almashinadigan qatronlar (odatda payvandlangan ion almashinadigan guruhlarga ega stirol va divinilbenzolning sopolimerlari) yoki payvandlangan ion almashinadigan guruhlarga ega silikagellardir.
Guruhli sorbentlar: —NH3+, —R3N+, —R2HN+, —RH2N+ va boshqalar anionlarni (anionitlarni) ajratish uchun, sorbentlar esa guruhli: —SO3–, —RSO3–, –SOON, —PO3– , va boshqalar ajratish kationlari (kation almashinuvchilari) uchun ishlatiladi.

Kislotalar, asoslar va tuzlarning suvdagi eritmalari ion almashinuvi xromatografiyasida harakatlanuvchi faza sifatida ishlatiladi. Odatda, bufer eritmalari ma'lum pH qiymatlarini saqlab qolish uchun ishlatiladi. Suv bilan aralashadigan organik erituvchilar - asetonitril, metanol, etanol, tetrahidrofuranning kichik qo'shimchalaridan ham foydalanish mumkin.

Ion xromatografiyasi - ion almashinish xromatografiyasining bir varianti bo'lib, unda konduktometrik detektor aniqlanishi kerak bo'lgan birikmalarni (ionlarni) aniqlash uchun ishlatiladi. Detektordan o'tadigan mobil fazaning o'tkazuvchanligidagi o'zgarishlarni juda sezgir aniqlash uchun mobil fazaning fon o'tkazuvchanligi past bo'lishi kerak.

Ion xromatografiyasining ikkita asosiy varianti mavjud.

Ulardan birinchisi - ikki ustunli ion xromatografiyasi, ikkinchi ion almashinadigan ustun yoki analitik ustun va detektor o'rtasida joylashgan maxsus membranani bostirish tizimi yordamida harakatlanuvchi faza elektrolitining elektr o'tkazuvchanligini bostirishga asoslangan. Tizimdan o'tayotganda mobil fazaning o'tkazuvchanligi pasayadi.

Ion xromatografiyasining ikkinchi varianti bitta ustunli ion xromatografiyasidir. Ushbu variant juda past elektr o'tkazuvchanligi bo'lgan mobil fazadan foydalanadi. Zaif organik kislotalar elektrolitlar sifatida keng qo'llaniladi: benzoik, salitsil yoki izoftalik.

Hajmini istisno qilish yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi
Hajmni istisno qilish xromatografiyasi (gel xromatografiyasi) molekulalarni o'lchamlari bo'yicha ajratishga asoslangan yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasining maxsus versiyasidir. Molekulalarning statsionar va harakatlanuvchi fazalar oʻrtasida taqsimlanishi molekulalarning oʻlchamiga va qisman ularning shakli va qutbligiga bogʻliq.

Molekulalarning g'ovakli statsionar faza bilan o'zaro ta'sirining ikkita cheklovchi turi mumkin. Maksimal g'ovak diametridan kattaroq molekulalar umuman saqlanmaydi va birinchi navbatda elutsiya qilinadi, mobil faza bilan bir vaqtda harakatlanadi.

Sorbentning minimal g'ovak diametridan kichikroq bo'lgan molekulalar g'ovaklarga erkin kirib boradi va kolonnadan eng oxirgi bo'lib chiqariladi. Oraliq o'lchamdagi qolgan molekulalar qisman g'ovaklarda saqlanadi va elyusiya paytida o'z o'lchamlariga ko'ra fraktsiyalarga bo'linadi va qisman shakli bo'yicha kattaligiga va qisman qismiga qarab sorbentning teshiklariga kiradi. ularning shakli. Natijada moddalar turli xil saqlanish vaqtlari bilan elimatsiya qilinadi.
Ionlarni chiqarib tashlash xromatografiyasi
Ionlarni chiqarib tashlash xromatografiyasining mexanizmi ionlangan shakldagi birikmalarning sorbent-ion almashinishda ushlanib qolmasligi, molekulyar shakldagi birikmalarning esa statsionar va suvli fazalar o'rtasida taqsimlanishiga asoslanadi. ion almashinadigan sorbent va sorbent zarralari orasidagi bo'shliqda harakatlanuvchi faza. Ajratish elektrostatik repulsiyaga, erigan birikmalar va sorbent o'rtasidagi qutbli va hidrofobik o'zaro ta'sirga asoslangan.
Sorbent yuzasida joylashgan anion guruhlar statsionar va harakatlanuvchi fazalar orasida yarim o‘tkazuvchan “membran” vazifasini bajaradi. Salbiy zaryadlangan komponentlar statsionar mobil fazaga etib bormaydi, chunki ular xuddi shunday zaryadlangan funktsional guruhlar tomonidan qaytariladi va ustunning "o'lik" (erkin) hajmida elute qilinadi. Molekulyar shakldagi komponentlar kation almashinadigan sorbent tomonidan "rad etilmaydi" va statsionar va harakatlanuvchi fazalar o'rtasida taqsimlanadi.
Aralashmaning ion bo'lmagan komponentlarini ushlab turish darajasidagi farq ion bo'lmagan komponentlarning kation almashinadigan sorbentning funktsional guruhlari bilan qutbli o'zaro ta'siri va ion bo'lmagan komponentlarning qutbsiz bo'lgan gidrofobik o'zaro ta'siri bilan bog'liq. sorbent matritsasi.
Xiral xromatografiya
Xiral xromatografiyaning maqsadi optik izomerlarni ajratishdir. Ajratish chiral statsionar fazalarda yoki an'anaviy axiral statsionar fazalarda chiral mobil fazalar yordamida amalga oshiriladi. Siral markazlarga ega bo'lgan guruhlar yoki moddalar (xitozanlar, siklodekstrinlar, polisaxaridlar, oqsillar va boshqalar) (xiral selektorlar) tomonidan o'zgartirilgan sirtga ega sorbentlar xiral statsionar fazalar sifatida ishlatiladi. Bu holda, xuddi shu fazalar odatdagidek mobil fazalar sifatida ishlatilishi mumkin. fazali yoki teskari fazali xromatografiya.
Axiral statsionar fazalardan foydalanilganda, enantiomerlarning ajralishini ta'minlash uchun mobil fazalarga chiral modifikatorlar qo'shiladi: chiral metall komplekslari, neytral xiral ligandlar, chiral ion-juft reagentlar va boshqalar.
Ultra Performance suyuqlik xromatografiyasi
Ultra samarali suyuqlik xromatografiyasi suyuq xromatografiyaning klassik yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasiga qaraganda samaraliroq variantidir.

Ultra samarali suyuqlik xromatografiyasining o'ziga xos xususiyati zarracha hajmi 1,5 dan 2 mikrongacha bo'lgan sorbentlardan foydalanishdir. Xromatografik ustunlar odatda uzunligi 50 dan 150 mm gacha va diametri 1 dan 4 mm gacha.

AOK qilingan namunaning hajmi 1 dan 50 mkl gacha bo'lishi mumkin. Bunday xromatografik ustunlardan foydalanish tahlil vaqtini sezilarli darajada qisqartirishi va xromatografik ajratish samaradorligini oshirishi mumkin. Biroq, bu holda, ustundagi bosim 80 - 120 MPa ga yetishi mumkin, kerakli detektor ma'lumotlarini yig'ish tezligi 40-100 gertsgacha oshishi mumkin, xromatografik tizimning ustundan tashqari hajmini minimallashtirish kerak. Ultra samarali suyuqlik xromatografiyasida ishlatiladigan xromatografiya uskunalari va ustunlari ushbu turdagi xromatografiya talablarini bajarish uchun maxsus moslashtirilgan.
Ultra samarali suyuqlik xromatografiyasi uchun mo'ljallangan uskunalar yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasining klassik versiyasida ham qo'llanilishi mumkin.