O‘zbekiston respublikasi sog‘liqni saqlash vazirligi toshkent farmatsevtika instituti sanoat farmatsiyasi fakulteti

Dorivor o'simlik materiallarida taninlarning sifat va miqdoriy tarkibini aniqlash usuli.
Tanin moddasini aniqlash uchun reaktsiyalari:
• Taninlarga maxsus reaktsiyasi jelatin bilan cho'kma reaktsiyasidir. 10% natriy xlorid eritmasida 1% jelatin eritmasidan foydalaniladi. Ortiqcha jelatinda eriydigan paxtasimon cho'kma paydo bo'ladi. Jelatin bilan manfiy reaktsiya taninlarning yo'qligini ko'rsatadi.
• Alkaloidlarning tuzlari bilan reaksiyasi. Taninlarning gidroksil guruhlari va alkaloidning azot atomlari bilan vodorod bog'lanish xosil bolishi natijasida amorf cho'kma paydo bo'ladi.
Bu reaksiyalar taninlar guruhidan qat'iy nazar bir xil natija beradi.
Taninlar guruhini aniqlash uchun reaktsiyalar:
• Stiasny reaksiya - 40% formaldegid eritmasi bilan va kontsentirlangan HCl - Kondensatsiyalangan taninlar g'isht-qizil rangli cho'kma hosil qiladi
• Bromli suv (1 litr suvda 5 g brom) - tekshiriluvchi probirkaga brom hidi paydo bo'lguncha 2-3 ml tomchilab bromli suv qo'shiladi; agar kondensatsiyalangan taninlar mavjud bo'lsa, olov sariq yoki sariq cho'kma hosil bo'ladi.
• Uch valentli temir tuzlari, temir ammoniy aluminiy bilan bo'yash - qora-ko'k (pirogallol hosilalari bo'lgan gidrolizlanadigan guruhning taninlari) yoki qora-yashil (kondensatsiyalangan guruhning taninlari, pirokatexol hosilalari).
• Katexinlar vanillin bilan birgalikda qizil rang beradi (kontsentirlangan HCl yoki 70% H₂SO₄ ishtirokida yorqin qizil rang hosil bo'ladi). Katexinlar bu reaksiyada quyidagi strukturaning rangli mahsulotini hosil qiladi:

Miqdoriy aniqlash.
1) Gravimetrik yoki vaznli usullar - taninlarni jelatin, og'ir metall ionlari bilan yoki teri (yalang'och) kukun bilan adsorbsiyasiga asoslangan miqdoriy cho'ktirish.
Tanin- ekstrakt sanoatida rasmiy usul - yagona og'irlik usuli (BEM) hisoblanadi:
O'simlik materialidan olingan suvli ekstraktlarda eriydigan moddalarning umumiy miqdori (quruq qoldiq) birinchi navbatda ma'lum hajmdagi ekstraktni doimiy vaznga quritish orqali aniqlanadi; keyin taninlar yog'sizlantirilgan teri kukuni bilan ishlov berish orqali ekstraktdan chiqariladi; filtratdagi cho'kma ajratilgandan so'ng, quruq qoldiq miqdori yana o'lchanadi. Ekstraktni teri kukuni bilan ishlovdan oldingi va keyingi quruq qoldiq massasidagi farq haqiqiy taninlar miqdorini ko'rsatadi.
2) Titrimetrik usullar
• Jelatin usuli - Yakimov va Kurnitskaya usuli - taninlarning oqsillar bilan erimaydigan komplekslar hosil qilish qobiliyatiga asoslangan. Xom ashyodan olingan suvli ekstraktlar jelatinning 1% eritmasi bilan titrlanadi; ekvivalent nuqtada jelatin-tannat komplekslari reaktivning ortiqcha miqdorida eriydi. Titr sof tanin bilan aniqlanadi. Valentlik nuqtasi tanninlarning to'liq cho'kishiga olib keladigan titrlangan eritmaning eng kichik hajmidan namuna olish yo'li bilan aniqlanadi.
Usul eng aniq hisoblanadi, chunki u haqiqiy tanin miqdorini aniqlash imkonini beradi.
Usulning kamchiliklari: aniqlashning davomiyligi va ekvivalentlik nuqtasini o'rnatishdagi qiyinchilik.
• Permanganatometrik usul (Kursanov tomonidan modifikatsiyalangan Levental usuli). Ushbu farmakopeya usuli eritmaning ekvivalent nuqtasida ko'kdan oltin sariq ranggacha o'zgarib turadigan indigo sulfon kislotasining indikatori va katalizatori ishtirokida kislotali muhitda kaliy permanganat bilan oson oksidlanishiga asoslangan.
Aniqlashning faqat taninlarning makromolekulalarini titrlash imkonini beruvchi xususiyatlari: titrlash yuqori darajada suyultirilgan eritmalarda (ekstraktsiya 20 marta suyultiriladi) xona haroratida kislotali muhitda amalga oshiriladi, permanganat asta-sekin, tomchilab, kuchli aralashtirish bilan qo'shiladi.
Usul tejamkor, tez, bajarilishi oson, ammo etarlicha aniq emas, chunki kaliy permanganat qisman past molekulyar og'irlikdagi fenolik birikmalarni ham oksidlaydi.
3) Fizikaviy va kimyoviy usullar
• Fotoelektrokolorimetrik usul.
Ushbu usul taninlarning temir (III) tuzlari, fosfor-volfram kislota, Folin-Denis reaktivi va boshqa moddalar bilan rangli kimyoviy birikmalar hosil qilish qobiliyatiga asoslangan. Reagentlardan biri dorivor osimlik homashyosida o'rganilayotgan ekstraktga qo'shiladi, barqaror rang paydo bo'lgandan so'ng, fotokolorimetrda optik zichligi o'lchanadi. Taninlar foizi miqdori ma'lum konsentratsiyali bir qator tanin eritmalari yordamida tuzilgan kalibrlash egri chizig'idan aniqlanadi.
• Spektrofotometrik aniqlash. Suvli ekstrakt olingandan so'ng, uning bir qismi 5 minut davomida 3000 aylanish tezligida sentrifugalanadi. Sentrifugaga ammoniy molibdatning 2% li suvli eritmasi qo'shiladi, shundan so'ng u suv bilan suyultiriladi va 15 daqiqaga qoldiriladi. Olingan rangning intensivligi qatlam qalinligi 10 mm bo'lgan kyuvetada 420 nm to'lqin uzunligidagi spektrofotometrda o'lchanadi. Taninlarni hisoblash standart namunaga muvofiq amalga oshiriladi. Taninning DSN standarti namuna sifatida ishlatiladi.
• Xromatografik aniqlash. Kondensatsiyalangan taninlarni aniqlash uchun spirt (95% etil spirti) va suv ekstraktlari olinadi, qog'oz va yupqa qatlamli xromatografiya o'tkaziladi. Standart namuna sifatida katexinning DSN dan foydalaniladi. Ajratish erituvchi tizimlarda butanol - sirka kislota - suv(40: 12: 28), (4: 1: 2), "Filtrak" markali qog'ozda 5% sirka kislotasi va "Silufol" plastinkalarida amalga oshiriladi. Xromatogrammada moddalar zonalarini aniqlash UF nurida amalga oshiriladi, so'ngra temir ammoniyli aluminiyning 1% eritmasi yoki vanilinning 1% eritmasi, konsentrlangan xlorid kislotasi bilan ishlov beriladi. Keyin 250-420 nm diapazonda yutilish spektrini olib, taninlar plastinkasidan etil spirti bilan elyusiya qilish va spektrofotometrik tahlil qilish orqali miqdoriy tahlil qilish mumkin.
• Amperometrik usul. Usulning mohiyati ma'lum bir potentsialda ishchi elektrod yuzasida fenol tabiatli tabiiy antioksidantlarning -OH guruhlarini oksidlanish jarayonida yuzaga keladigan elektr tokini o'lchashdan iborat. Dastlab, mos yozuvlar namunasi (kvercetin) signalining uning kontsentratsiyasiga grafik bog'liqligi ko'riladi va olingan kalibrlashdan foydalanib, kversetin konsentratsiyasi birliklarida o'rganilayotgan namunalardagi fenollarning tarkibi hisoblanadi.
• Potensiometrik titrlash. Ushbu turdagi suvli ekstraktni titrlash (xususan, eman po'stlog'ining qaynatmalari) kaliy permanganat eritmasi (0,02 M) bilan amalga oshirildi, natijalar pH o'lchagich (pH-410) yordamida qayd etildi. Titrlashning so'nggi nuqtasini aniqlash Gran usuli bo'yicha "GRAN v. 0. 5" EHM dasturida amalga oshirildi. Titrlashning potentsiometrik usuli aniqroq natijalar beradi, chunki ekvivalentlik nuqtasi aniq belgilangan bolib, inson omili ta’sirida natijalarning noto‘g‘riligini bartaraf etadi. Potensiometrik titrlash rangli eritmalarni, masalan, taninlar bo‘lgan suvli ekstraktlarni o‘rganishda indikator titrlash bilan solishtirganda ayniqsa muhimdir.
• Kulonometrik titrlash. O'simliklar tarkibidagi taninlar miqdorini kulonometrik titrlash yo‘li bilan tanin bo‘yicha miqdoriy aniqlash usuli shundan iboratki, xomashyodan o‘rganilayotgan ekstrakt kulometrik titrant – gidrogenlangan yodning ishqoriy muhitda nomutanosibligi natijasida hosil bo‘ladigan gipoyodit ionlari bilan reaksiyaga kirishadi. Gipoyodit ionlarining elektrogeneratsiyasi 5,0 mA doimiy oqim kuchida platina elektrodida fosfat bufer eritmasidagi (pH 9,8) kaliy yodidning 0,1 M eritmasidan amalga oshiriladi [7].
Shunday qilib, dorivor o'simlik mahsulotlarda taninlarni miqdoriy aniqlash uchun quyidagi usullardan titrimetrik (jumladan, jelatin, kaliy permanganat bilan titrlash, Trilon B bilan kompleksometrik titrlash, potensiometrik va kulonometrik titrlash), gravimetrik titrlash, fotoelektrokolorimetrik, spektrofotometrik, amperometrik usullarda foydalaniladi.