• "to'mtoq" uchlarda tikish. Bu unchalik samarali bo'lmagan usul, shuning uchun
rekombinant DNK molekulalarini olish uchun yopishqoq uchlar ishlatiladi;
• uchlarini qarama-qarshi yopishqoq uchlari bilan tikish.
Bir-biriga o'xshash bo'lmaganlar uchun, ya'ni.bir-birini to'ldirmaydigan,
"yopishqoq" uchlari bog'lovchilar yoki "adapterlar" deb nomlanadi.
Linkerlar
- bu cheklangan joylar (parchalanish joylari) yoki ularning birikmasi
bo'lgan kimyoviy sintezlangan oligonukleotidlar. To'g'ridan-to'g'ri
yopishqoq uchini
o'z ichiga olgan turli xil bog'lovchilar mavjud. DNK sinov naychasida o'zaro
bog'langanidan so'ng, u tirik hujayralarga kiritilishi va genetik ma'lumotlarning
barqaror saqlanishini ta'minlashi kerak. Bunga vektor molekulalari yoki vektorlari deb
ataladigan narsalar yordamida erishiladi.
Vektor molekulalari yoki vektorlari
- bu DNKning begona DNKni qabul qilish
va uning ko'payishini va ehtimol ekspressiyasini ta'minlashga qodir bo'lgan
molekulalari.
Gen ekspressiyasi
- bu ribonuklein kislota, oqsil va fenotipik xususiyat shaklida
genda qayd etilgan genetik ma'lumotlarning namoyon bo'lishi.
Vektorlar hujayraga qo'shimcha genetik ma'lumot kiritishga imkon beradi. Odatda
vektor sifatida plazmidlar, bakteriofaglar va hayvon viruslari ishlatiladi.
Transgen o'simliklar yaratishda tuproq bakteriyalari (Agrobakteriyalar)
organizmida
paydo bo'ladigan tabiiy gen vektoridan foydalaniladi. Deyarli barcha ikki pallali
o'simliklar agrobakteriyalarga ta'sir qiladi, ammo donli va boshqa bir pallali o'simliklar
emas.
Agrobacterium tumefacies va Agrobacterium rhizogenes tuproq bakteriyalari
asosan gen muhandisligida qo'llaniladi. Plazmid Ti (A. qo'zg'aluvchanlikda)
yoki Ri
(A. rizogenlarda) turiga qarab, ular o'simlik organizmiga kirgandan so'ng, begona
genlarni (onkogenlar)
ifoda eta boshlaydi, bu esa chishlar hosil bo'lishiga olib keladi
yaniy o'smalarni. Olimlar Ti va Ri plazmidlarning ko'chirilgan qismidagi (T-DNK deb
ataladigan) onkogenlarni o'simlikka kiritilishi kerak bo'lgan genlar bilan almashtirish
orqali "qurolsizlantirishni" o'rgandilar.
Boshqa
DNKni joriy etish
usullaridan biri bu
oraliq vektordan foydalanish (14.1-rasm).
Ushbu usulning mohiyati quyidagicha: restriktiv fermentlardan foydalangan
holda
T-DNK plazmiddan kesilib, E. coli-da klonlash uchun vektorga kiritiladi,
masalan pBR 322. T-DNKli plazmid kengaytirilgan va standart usullardan
foydalangan holda , T-mintaqasiga begona gen kiritiladi va
allaqachon kiritilgan gen
bilan yana tarqaladi. Natijada hosil bo'lgan rekombinant plazmid to'liq Ti plazmidini
olib yuruvchi A. tumefacience hujayralariga kiritiladi.T-DNKning gomologik
mintaqalari orasidagi ikki martalik rekombinatsiya natijasida
rekombinant plazmidning
begona genni o'z ichiga olgan qismi Ti-plazmidga qo'shilib, undagi normal T-DNK
o'rnini egallaydi.
Do'stlaringiz bilan baham: