Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Таблица1.
Основной опыт реакции связывания комплемента (схема)

Ингредиенты, мл	Пробирки №
	1	2	3	4	5	6	7
Исследуемая сыворотка, разбавленная в соотношении 1:5	0.2	-	-	0.2	-	-	-
Положительная сыворотка	-	0.2	-	-	-	-	-
Отрицательная сыворотка	-	-	0.2	-	-	-	-
Антиген	0.2	0.2	0.2	-	0.2	-	-
Изотонический раствор хлорида натрия	-	-	-	0.2	0.2	0.4	0.6
Рабочая доза комплемента	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	-
Инкубация при 37º С 30 мин	Или инкубируют при 0-4º С ( холодная инкубация)
Гемолитическая система	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4
Инкубируют при 37 С в 20-30 мин
Результаты	±	+	-	-	-	-	-

В качестве контроля (2 и 3 пробирки) берутся сыворотки, заранее дающие положительную и отрицательную реакцию, 4 и 5 пробирки служат для контроля сыворотки и антигена на комплемент, в 6 и 7 пробирках проверяется качество комплемента и гемолитической системы.
Реакции прямой и непрямой гемагглютинации (РПГ)
Реакция прямой гемагглютинации (РПГ). Сущность реакции состоит в том, что, если в сенсибилизированные различными антигенами эритроциты добавить иммунную сыворотку или соответствующие антигены больного, то сенсибилизированные эритроциты прилипают друг к другу, подвергаются агглютинации. Нельзя забывать о том, что антитела вступают в реакцию только со специфичными антигенами эритроцитов.
Реакция прямой (пассивной) гемагглютинации по своей чувствительности и специфичности превосходит другие серологические реакции. На сегодняшний день ряд модификаций широко используемых в диагностике инфекционных заболеваний, вызванных бактериями, риккетсиями. В этих реакциях используют антигены баранов, обезьян, свиней, птиц (петухи, гуси) и 1 (O) группу эритроцитов человека.


Рисунок 59. Реакция прямой и непрямой гемагглютинации

А в качестве антигена используют очищенные антигены микробов, вирусов и других микроорганизмов, их токсины и различные белковые соединения. Сенсибилизированные антигенами эритроциты в медицинской промышленности выпускаются в виде эритроцитарных диагностикумов. При помощи таких эритроцитарных диагностикумов можно определить титры специфических антител в сыворотке крови больного и поставить серологический диагноз (брюшной тиф, ВИЧ-инфекция, бруцеллез, иерсиниозы и другие заболевания).

Во многих случаях эритроциты сенсибилизируются не антигенами, а специальными антителами. Обычно гетерогенные антитела не адсорбируются на поверхности эритроцитов и их связывают на мебраны эритроцитов при помощи химических веществ (СrCl₃, глютаровый альдигид). Эритроцитарные диагностикумы с такими антителами тоже выпускаются в промышленности. Определение антиген с такими эритроцитарными диагностикумами называется реакцией Повторной прямой гемагглютинации (рисунок) и применяется для диагностики многих заболеваний (гепатиты В,С, ВИЧ-инфекции, холера, дизентерия, чума и др.)