К 70-летию академика юнусова марата сабировича

ФУЛЛЕРЕН С
60
 В ОСНОВЕ ЛИГАНДА СТАЦИОНАРНОЙ ФАЗЫ
ДЛЯ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ МЕМБРАННЫХ
ПОРФИРИНСВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ 
 
М.А. Орлова, А.П. Орлов, Д.А. Кузнецов
 
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, химический ф-т; 
119899, Москва, Ленинские горы, д.1, стр.3 
[e-mail] 
Во внешней мембране митохондрий млекопитающих недавно была найдена минорная 
группа белков, обладающих заметной способностью к селективному связыванию порфирина 
К и его производных, но не связанных напрямую in situ ни с гемом, ни с любым другим пор-
фирином. Функциональная роль и структурные особенности этих мембранных белков неяс-
ны и требуют надежного метода выделения и очистки. 
Для решения проблемы предложена методика аффинной хроматографии, основанная на 
применении новой неподвижной фазы, содержащей в качестве лиганда порфириновый до-
мен, иммобилизованный на агарозной матрице посредством комплексного эпок-
си[циклогексил]С
60
-фуллеренового спейсера. В данной работе впервые используется фулле-
реновая наноструктура для оптимизации белок-порфиринового узнавания при аффинном 
связывании (рис.1). 
Был синтезирован лиганд, который иммобилизовали на ОН-группах агарозы (Sepharose 
CL-4B, Bio-Rad) через циклогексильный остаток обычным методом эпоксиактивации с кон-
тролем методами газовой хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией, после чего из-
меряли силу аффинного взаимодействия по известной методике. Митохондрии изолировали 
из миокарда крыс линии Wistar Albino Glaxo, затем фракцию внешних мембран очищали. 
Полученные образцы лиофилизовали и перед введением в колонку растворяли в фосфатном 
буферном растворе. Использовали колонку размером 1.7х52 см, для определения концентра-
ции белка применяли калориметрический метод, для характеристики гетерогенности выде-
ленных белковых фракций проводили блочный гель-электрофорез в 0.25% ДДС-12% ПААГ. 
На рис. 2 видно, что выделенная фракция ПСБ представляет собой мономолекулярный белок 
с М~17 кДа. Белковые или пептидные примеси обнаружены не были. 
C
11-17