I. Обзор литературы

2.4.4. Определение углеводного обмена
Уровень глюкозы натощак (ГН) в сыворотке крови определяли глюкозооксидантным методом с использованием наборов «Агат – Мед» (Москва, Россия) в клинико-диагностической лаборатории (зав. - доц. Азимбаев А.А.) Клиник Андижанского медицинского института.
Для оценки степени нарушения углеводного обмена проводили стандартный 2-часовой пероральный глюкозотолерантный тест (ПГТТ). Диагностические значения результатов ПГТТ оценивали по критериям ВОЗ (1999, 2006) [121]. Согласно этим критериям, СД оценивался при концентрации глюкозы в сыворотке крови натощак ≥6,1 ммоль/л, через 2 часа после ПГТТ ≥11,1 ммоль/л. Нарушенная толерантность к глюкозе оценивалась при уровне ГН <6,1 ммоль/л, через 2 часа ПГТТ - ≥7,8 и <11,1 ммоль/л. Нарушенная гликемия натощак - ≥5,6 и <6,1 ммоль/л, через 2 часа после ПГТТ <7,8 ммоль/л.
Содержание иммунореактивного инсулина (ИРИ) в сыворотке крови определяли с использованием стандартных радиоиммунных наборов фирмы «Beckman Coulter» (Чехия) на микропланшетном ридере EL х 800 фирмы Фин Био (Финляндия) на счётчиках «Gamma-12», «Strantg- 300» в радиоиммунной лаборатории (зав. – с.н.с. к.б.н. Абдурахманова А.М.) РСНПМ Центра Эндокринологии (директор - д.м.н., проф. Исмоилов С.И.) .
Для более точной оценки степени инсулинорезистентности использовали индекс HOMA (Homeostasis model assesment), который рассчитывали по формуле:
Индекс HOMA= инсулин (мкЕд/мл) х глюкоза (ммоль/л) : 22,5
Содержание гликированного гемоглобина (HbА₁c) определяли методом колоночной хроматографии на автоанализаторе А₁cНА - 8110А фирмы «Kyoto Daich» (Япония) в лаборатории Андижанского медицинского института.
Определение антител к рецепторам инсулина в сыворотке крови проводилось набором Anti-Insulin Receptor Antibody фирмы Эли-Висцеро-Тест (Москва, Россия) методом иммуноферментного анализа в лаборатории «Иммуноген-Тест» института иммунологии АН РУз.
2.4.5. Определение состояния эндотелия
Определение уровня гуморальных эндотелиальных медиаторов
Уровень эндотелина-1 (ЭТ-1) в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с помощью наборов «Endothelin» (Германия). Уровень сосудистой молекулы адгезии SVCAM-I (Soluble vascular cell adhesion molecule) определяли в иммуноферментном тесте наборами фирмы IEMA (Германия). Оба исследования проведены в лаборатории «Иммуноген-Тест» института иммунологии АН РУз.
В обоих исследованиях использован «сэндвич» - вариант твёрдофазного иммуноферментного анализа с применением моноклональных антител с различной эпитопной специфичностью.
Уровень ИФР-1 в сыворотке крови определяли радиоиммунным методом с использованием радиоиммунных наборов фирмы «Beckman Coulter» (Чехия) на счётчиках «Gamma-12» и «Strantg -300» в радиоиммунной лаборатории РСНПМ Центра Эндокринологии.
Принцип метода основан на конкуренции меченного и немеченного гормона за антитело, т.е. ИФР-1, находящийся в стандартах, находится в обратном соотношении с количеством немеченного ИФР-1 в образцах.
Определение содержания циркулирующих в крови десквамированных эндотелиальных клеток (ЦДЭ) проводилось по методу G. Hiadovec (1978) [255] в клинико-диагностической лаборатории Клиник Андижанского медицинского института.
Метод основан на изоляции клеток эндотелия вместе с тромбоцитами с последующим осаждением последних с помощью аденозиндифосфата. Количество ЦДЭ подсчитывалось в 2^х сетках камеры Горяева методом фазово-контрастной микроскопии, результат умножали на 10⁴/л. Значение ЦДЭ>5 в поле зрения расценивалось как признак повреждения эндотелия (эндотелиемия).
Определение антинейтрофильных цитоплазматических аутоантител (АNCA) и аутоантител мембранного антигена кардиомиоцитов (СОM-02) проводились методом иммуноферментного анализа (ИФА), направленным на полуколичественную оценку относительных изменений в их содержании в сыворотке крови с помощью наборов фирмы ООО медицинского исследовательского центра «Иммункулус» (Москва, Россия) в лаборатории «Иммуноген-Тест» института иммунологии АН РУз.
Принцип метода. В лунках планшета с предварительно сорбированными антигенными компонентами, после добавления разведённых контрольной сыворотки и анализируемых проб сыворотки крови и их инкубации, устанавливается равновесие между связанными и свободными антителами к соответствующим антигенам. После удаления содержимого лунок и внесения в них раствора коньюгата кроличьих антител к IgG человека с пероксидазой хрена происходит адсорбция молекул коньюгата в количестве, прямо пропорциональному количеству связавшихся аутоантител. После удаления избытка несвязанного коньюгата проводится ферментативная реакция пероксидазы с перекисью водорода в присутствии хромогена (тетраметилбензидина-ТМБ) для определения активности пероксидазы. Интенсивность окраски хромогена пропорциональна концентрации антител в анализируемом образце. После остановки пероксидазной реакции стоп-реагентом, оценка результатов проводится фотометрически при длине волны γ=450 нм. Далее проводится расчёт результатов относительной иммунореактивности показателей в пробах, выраженных в процентах от иммунореактивности контрольной сыворотки.