I. Обзор литературы

2.4.3. Определение адипоцитокинов жировой ткани

Уровни лептина и рецепторов лептина определялись методом конкурентного варианта иммуноферментного анализа на наборах фирмы «BioVendor» Human Leptin ELISA (Чехия) и «BioVendor» Human Leptin Receptor ELISA (Чехия) на микропланшетном ридере EL х 100 фирмы ФинБио (Финляндия) также в лаборатории «Иммуноген-Тест» института иммунологии АН РУз.

Уровень адипонектина определялся аналогично, при помощи конкурентного варианта иммуноферментного анализа на наборах фирмы «BioVendor» Human Adiponectin ELISA (Чехия) на микропланшетном ридере EL х 100 фирмы ФинБио (Финляндия) в лаборатории «Иммуноген-Тест» (зав. - д.м.н. Хегай Т.Р.) института иммунологии АН РУз (директор - д.м.н. проф. Арипова Т.У.).
Цитокиновый статус определяли по уровню интерлейкинов в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа. Для исследования использован тест набор ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург, Россия). Исследования проведены в лаборатории иммуноморфологии (зав. - д.б.н. Мусаходжаева Д.А.) института иммунологии АН РУз (директор - д.м.н. проф. Арипова Т.У.).
Принцип работы набора. В наборе использован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использовано по два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к интерлейкинам- 1β, 4, 6, 8,10, TNFα, IFNγ. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе - коньюгировано с пероксидазой. На первой стадии анализа, содержащийся в калибровочных и исследуемых пробах интерлейкин связывается с антителами, иммобилизированными на внутренней поверхности лунок. На второй стадии анализа иммобилизованный интерлейкин взаимодействует с коньюгатом вторых антител – пероксидазой. Количество связавшегося коньюгата прямо пропорциально количеству интерлейкина в образце.
Во время инкубации с субстратной смесью происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся меченных антител. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочной кривой рассчитывается концентрация соответствующего интерлейкина в определяемых образцах.
Неспецифическое воспаление определяли по уровню высокочувствительного С-реактивного белка (вчСРБ) иммунотурбодиметрическим методом наборами фирмы «Вектор-Бест» (Новосибирск, Россия) в лаборатории ЦНИЛ Андижанского медицинского института.
Метод основан на использовании латексных микрочастиц с адсорбированными на их поверхности моноклональными антителами к человеческому СРБ. К исследуемому образцу сыворотки добавляли суспензии микрочастиц с образованием сложноорганизованной пространственной структуры. Величину светорассеивания или светопоглощения оценивали количественно с помощью анализатора «Biocon» методом «латексного усиления».
Чувствительность метода - 0,05 мг/л. Диапазон измерения - 0-10 мг/л.