Hisoblashning ochiq ramkasini izlash

Genning haddan tashqari ifodalanishi funktsiyani baholash uchun ham ishlatilishi mumkin.

Hozirgacha biz o'rganilayotgan genning inaktivatsiyasiga olib keladigan usullarga e'tibor qaratdik (funktsiyani yo'qotish). Qo'shimcha yondashuv sinov geni odatdagidan ancha faolroq bo'lgan organizmni yaratish (funktsiyani kuchaytirish) va agar mavjud bo'lsa, bu fenotipda qanday o'zgarishlar bo'lishini aniqlashdir. Ushbu tajribalarning natijalariga ehtiyotkorlik bilan munosabatda bo'lish kerak, chunki haddan tashqari ifodalangan genning o'ziga xos funktsiyasi bilan bog'liq bo'lgan fenotip o'zgarishi va bitta gen mahsuloti bo'lgan vaziyatning anormalligini aks ettiruvchi kamroq o'ziga xos fenotip o'zgarishi o'rtasidagi farqni ajratish zarurati. haddan tashqari ko'p miqdorda sintezlanadi, ehtimol gen odatda faol bo'lmagan to'qimalarda. Ushbu malakaga qaramay, haddan tashqari ekspressiya gen funktsiyasi haqida ba'zi muhim ma'lumotlarni taqdim etdi.
Genni haddan tashqari ifodalash uchun klonlash vektorining maxsus turidan foydalanish kerak, u klonlangan gen iloji boricha ko'proq protein sintezini boshqarishini ta'minlash uchun mo'ljallangan. Shuning uchun vektor ko'p nusxali, ya'ni u mezbon organizm ichida har bir hujayra uchun 40 nusxaga ko'payadi, shuning uchun sinov genining ko'plab nusxalari mavjud. Vektor shuningdek, yuqori faol promouterni (9.2.2-bo'lim) o'z ichiga olishi kerak, shunda sinov genining har bir nusxasi ko'p miqdorda mRNKga aylanadi va yana iloji boricha ko'proq protein hosil bo'lishini ta'minlaydi. Sichqoncha genlari bilan qo'llaniladigan texnikaga misol 7.18-rasmda ko'rsatilgan (Simonet va boshqalar., 1997). Ushbu loyihada o'rganiladigan genlar tanlab olindi, chunki ularning ketma-ketligi qon oqimiga ajraladigan oqsillarni kodlashini taklif qildi. Ishlatilgan klonlash vektorida faqat jigarda ifodalanadigan yuqori faol promotor mavjud edi, shuning uchun har bir transgen sichqon o'z jigarida sinov genini haddan tashqari oshirib yubordi va natijada olingan proteinni qonga ajratdi. Har bir transgen sichqonchaning fenotipi klonlangan genlarning funktsiyalariga oid maslahatlarni izlashda tekshirildi. Bitta transgen sichqonchaning suyaklari oddiy sichqonlarnikidan sezilarli darajada zichroq ekanligi aniqlanganda qiziqarli kashfiyot qilindi. Bu ikki sababga ko'ra muhim edi: birinchidan, tegishli genni suyak sintezida ishtirok etuvchi gen sifatida aniqlash imkonini berdi, ikkinchidan, suyak zichligini oshiradigan oqsilning kashf etilishi inson osteoporozi, mo'rt suyak kasalligini davolash usullarini ishlab chiqishga ta'sir qiladi.